| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的概述 | 第7-9页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的来源 | 第7页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的理化性质 | 第7页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的代谢机制 | 第7-8页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的用途 | 第8-9页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶研究进展 | 第9-11页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的抗肿瘤活性 | 第9-10页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的克隆与表达 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统概述 | 第11-12页 |
| ·pET 表达系统 | 第12页 |
| ·本课题研究背景、意义和课题来源 | 第12页 |
| ·本课题的研究思路和内容 | 第12-13页 |
| 第二章 精氨酸脱亚胺酶的克隆与序列分析 | 第13-21页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·材料与方法 | 第13-17页 |
| ·菌株、载体和培养基 | 第13页 |
| ·主要试剂和缓冲液 | 第13-14页 |
| ·主要设备 | 第14页 |
| ·PCR 扩增目标基因 | 第14页 |
| ·DNA 操作 | 第14-15页 |
| ·克隆载体的构建 | 第15-16页 |
| ·重组质粒的筛选和验证 | 第16-17页 |
| ·基因序列的测定 | 第17页 |
| ·结果与讨论 | 第17-18页 |
| ·变形假单胞菌基因组DNA 的提取 | 第17页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因的PCR 扩增 | 第17页 |
| ·克隆载体pGEM-ADI 的构建 | 第17-18页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因序列分析 | 第18页 |
| ·本章小结 | 第18-21页 |
| 第三章 精氨酸脱亚胺酶大肠杆菌表达载体的构建及其表达 | 第21-36页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-29页 |
| ·菌株、载体和培养基 | 第21-22页 |
| ·主要试剂、工具酶和缓冲液 | 第22页 |
| ·主要设备 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增目标基因 | 第23页 |
| ·DNA 操作 | 第23页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第23-26页 |
| ·表达载体的筛选和酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·基因序列的测定 | 第27页 |
| ·摇瓶诱导表达及表达条件的初步优化 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·表达产物Western Blot 鉴定 | 第28页 |
| ·酶活测定 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-35页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因的PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·重组表达载体pET28a-ADI 的构建 | 第30页 |
| ·表达载体的筛选与酶切验证 | 第30-31页 |
| ·基因序列的测定 | 第31页 |
| ·重组子E. coli BL21(pET28a-ADI)的诱导表达及其条件的初步优化 | 第31-34页 |
| ·重组蛋白的Western Blot 鉴定 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第四章 重组精氨酸脱亚胺酶的纯化与酶学性质研究 | 第36-44页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·菌株与培养基 | 第36页 |
| ·主要试剂和缓冲液 | 第36-37页 |
| ·主要设备 | 第37页 |
| ·重组精氨酸脱亚胺酶亲和纯化 | 第37-38页 |
| ·样品的制备 | 第37页 |
| ·镍柱亲和层析 | 第37-38页 |
| ·蛋白质浓度的确定 | 第38页 |
| ·纯化蛋白SDS-PAGE | 第38页 |
| ·酶活的测定 | 第38页 |
| ·纯化蛋白酶活的测定 | 第38页 |
| ·酶学性质实验相对酶活的测定 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·重组精氨酸脱亚胺酶亲和纯化 | 第38-40页 |
| ·重组精氨酸脱亚胺酶的酶学性质 | 第40-43页 |
| ·pH 对重组精氨酸脱亚胺酶活性的影响 | 第40页 |
| ·温度对重组精氨酸脱亚胺酶活性的影响 | 第40-41页 |
| ·重组精氨酸脱亚胺酶温度稳定性的研究 | 第41-42页 |
| ·金属离子对重组精氨酸脱亚胺酶活性的影响 | 第42页 |
| ·化学试剂对重组精氨酸脱亚胺酶活性的影响 | 第42页 |
| ·重组精氨酸脱亚胺酶酶反应动力学参数的测定 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 总结与展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50-51页 |
| 附录2：基因序列测定 | 第51-52页 |