| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·托品烷类生物碱及其分布 | 第12-14页 |
| ·托品烷类生物碱(TAs)简介 | 第12-13页 |
| ·TAs在植物类群和植物体中的分布 | 第13-14页 |
| ·托品烷类生物碱的生物合成及化学诱导 | 第14-17页 |
| ·TAs及相关代谢产物的生物合成途径网 | 第14-16页 |
| ·TAs生物合成途径上的酶和基因 | 第16页 |
| ·化学诱导子对TAs生物合成的影响 | 第16-17页 |
| ·托品酮还原酶及其代谢工程研究进展 | 第17-21页 |
| ·托品酮还原酶(TRs)研究进展 | 第17-18页 |
| ·以TRs为靶点的代谢工程研究进展 | 第18-21页 |
| 第2章 绪论 | 第21-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第21页 |
| ·研究范围和内容 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-23页 |
| 第3章 材料与方法 | 第23-47页 |
| ·实验材料及试剂耗材 | 第23-25页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·试剂盒及试剂购买 | 第24页 |
| ·常规试剂和培养基的配置 | 第24-25页 |
| ·常规方法和操作步骤 | 第25-29页 |
| ·植物总RNA的提取与检测 | 第25-26页 |
| ·DNA产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·目的条带的回收 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌DH5α/Rosetta感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第27页 |
| ·连接产物或重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·重组子的鉴定、测序 | 第28页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·SDS法抽提颠茄基因组DNA | 第28-29页 |
| ·AbTRI基因的克隆与分析 | 第29-34页 |
| ·颠茄总RNA的提取与检测 | 第29页 |
| ·从颠茄总RNA合成第一链cDNA | 第29页 |
| ·AbTRI基因的克隆 | 第29-33页 |
| ·AbTRI基因的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·AbTRI基因的组织表达谱分析 | 第33-34页 |
| ·AbTRI基因的诱导表达谱分析 | 第34页 |
| ·AbTRI基因的原核表达及功能验证 | 第34-38页 |
| ·AbTRI基因原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·AbTRI重组蛋白的少量诱导表达 | 第36页 |
| ·变性条件下从包涵体中提取AbTRI重组蛋白 | 第36-37页 |
| ·考马斯亮蓝法(Bradford法)测定重组AbTRI蛋白含量 | 第37-38页 |
| ·AbTRI重组蛋白的复性 | 第38页 |
| ·AbTRI重组蛋白的活性测定 | 第38页 |
| ·颠茄发根的遗传转化 | 第38-39页 |
| ·菌株的活化 | 第38-39页 |
| ·工程菌C58C1-p1304~+- AbTRI对颠茄的叶盘法转化 | 第39页 |
| ·空菌C58C1及空载体工程菌C58C1-p1304~+对颠茄的叶盘法转化 | 第39页 |
| ·转化发根的分子及含量检测 | 第39-47页 |
| ·抗性发根的PCR检测 | 第39-41页 |
| ·转基因颠茄发根实时荧光定量PCR检测 | 第41-44页 |
| ·转基因颠茄发根生物碱的提取及检测 | 第44-47页 |
| 第4章 结果与分析 | 第47-65页 |
| ·AbTRI基因全长cDNA的获得和分析 | 第47-53页 |
| ·AbTRI基因的获得 | 第47-48页 |
| ·AbTRI基因的生物信息学分析 | 第48-52页 |
| ·AbTRI基因的组织表达谱和诱导谱分析 | 第52-53页 |
| ·AbTRI基因的原核表达及功能验证 | 第53-57页 |
| ·AbTRI基因原核表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·AbTRI重组蛋白的少量诱导表达 | 第55-56页 |
| ·AbTRI重组蛋白活性检测 | 第56-57页 |
| ·转AbTRI基因颠茄发根的获得 | 第57-59页 |
| ·农杆菌C58C1-p130~4+-AbTRI对颠茄的遗传转化 | 第57-58页 |
| ·工程菌C58C1-p1304~+-AbTRI转化发根的PCR检测 | 第58-59页 |
| ·转基因发根的托品烷生物碱含量检测 | 第59-61页 |
| ·莨菪碱、东莨菪碱的HPLC标准曲线 | 第59-60页 |
| ·转基因发根的托品烷生物碱含量 | 第60-61页 |
| ·转基因发根实时荧光定量PCR检测 | 第61-65页 |
| ·转基因发根RNA的提取 | 第61页 |
| ·转基因发根中TRI表达量的荧光定量PCR检测 | 第61-65页 |
| 第5章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 研究生期间发表论文、参研项目 | 第75页 |
