| 缩略表 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-31页 |
| 1.农杆菌概述及其遗传转化机理 | 第11-13页 |
| 2.转基因作物的发展概况 | 第13-24页 |
| ·抗虫植物的研究进展 | 第14-15页 |
| ·水稻遗传转化涉及的基因 | 第15-23页 |
| ·水稻基因转化的受体系统 | 第23-24页 |
| 3.水稻基因转化方法 | 第24-29页 |
| ·农杆菌介导法 | 第24-26页 |
| ·基因枪法 | 第26-27页 |
| ·PEG转化法 | 第27页 |
| ·电激法 | 第27-28页 |
| ·花粉管通道法 | 第28-29页 |
| ·脂质体转化法 | 第29页 |
| 4.立题依据和意义 | 第29-31页 |
| 材料与方法 | 第31-41页 |
| 1.材料 | 第31-35页 |
| ·菌株、质粒和水稻植株 | 第31页 |
| ·试剂和引物 | 第31-33页 |
| ·培养基和抗生素 | 第33-35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| 2.方法 | 第35-41页 |
| ·Bt4.0718菌株总DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增crylAct基因和vip3A基因 | 第36-38页 |
| ·中间载体的构建 | 第38页 |
| ·植物表达载体pBCAV的构建 | 第38页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第38页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·pBCAV质粒转化农杆菌 | 第39页 |
| ·幼胚的诱导 | 第39页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第39-40页 |
| ·农杆菌侵染和共培养 | 第40页 |
| ·愈伤组织脱菌、筛选 | 第40页 |
| ·愈伤组织的分化、PCR检测和抗性苗移栽 | 第40-41页 |
| 结果与分析 | 第41-54页 |
| 1.crylAct和vip3A基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.crylAct基因的连接 | 第42页 |
| 4.中间载体pETBI的构建 | 第42-43页 |
| 5.pETBI-crylAct质粒的构建 | 第43-45页 |
| 6.pETBI-vip3A质粒构建 | 第45-46页 |
| 7.含crylAct基因和vip3A基因载体pBCAV的构建 | 第46-48页 |
| 8.幼胚愈伤组织的诱导及胚性愈伤组织的获得 | 第48-49页 |
| 9.愈伤组织预培养及与农杆菌的共培养 | 第49页 |
| 10.抗性愈伤组织的潮霉素筛选 | 第49-51页 |
| 11.抗性愈伤组织的分化 | 第51-53页 |
| 12.抗性愈伤组织PCR检测结果 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-58页 |
| 1.crylAc和vip3A基因的选择 | 第54-55页 |
| 2.crylAc基因的核心结构域的选取 | 第55页 |
| 3.重组质粒pBCAV构建 | 第55-56页 |
| 4.潮霉素抗性基因的选择 | 第56页 |
| 5.转化受体的选择 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |