| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第15-27页 |
| ·猪圆环病毒的发现和命名 | 第15页 |
| ·猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第15-17页 |
| ·猪圆环病毒的全球流行和分布状况 | 第17页 |
| ·猪圆环病毒的形态学特性 | 第17-18页 |
| ·游离的PCV 病毒 | 第17页 |
| ·感染细胞内的PCV 病毒 | 第17-18页 |
| ·猪圆环病毒的理化特性 | 第18页 |
| ·浮密度及沉降系数 | 第18页 |
| ·理化抗性 | 第18页 |
| ·猪圆环病毒的基因组 | 第18-19页 |
| ·猪圆环病毒的复制与转录 | 第19-20页 |
| ·猪圆环病毒编码蛋白的研究 | 第20-21页 |
| ·猪圆环病毒2 型引起的疾病及其致病机理 | 第21-23页 |
| ·病理学研究 | 第23-24页 |
| ·猪圆环病毒感染的诊断 | 第24-26页 |
| ·病毒分离 | 第24页 |
| ·间接免疫荧光试验（IIF） | 第24页 |
| ·聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR） | 第24-25页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第25-26页 |
| ·原位核酸杂交试验（ISH） | 第26页 |
| ·猪圆环病毒感染的防制 | 第26-27页 |
| 第二章 DNA 疫苗的研究进展 | 第27-34页 |
| ·DNA 疫苗的研究进展 | 第27-31页 |
| ·DNA 疫苗的诞生、发展和作用原理 | 第27-28页 |
| ·DNA 疫苗的构建 | 第28页 |
| ·DNA 疫苗的免疫方法 | 第28-29页 |
| ·DNA 疫苗的免疫佐剂 | 第29-30页 |
| ·DNA 疫苗的优点 | 第30页 |
| ·DNA 疫苗存在的问题 | 第30-31页 |
| ·DNA 疫苗的影响因素及应用 | 第31页 |
| ·pAdTrack-CMV 载体 | 第31页 |
| ·PCV2DNA 疫苗的研究思路 | 第31-34页 |
| 第三章 本研究所用表达载体及技术路线简介 | 第34-40页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白研究进展 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的优缺点 | 第34页 |
| ·大肠杆菌表达外源蛋白的特性及存在形式 | 第34页 |
| ·影响大肠杆菌表达系统表达外源蛋白的因素 | 第34-35页 |
| ·腺病毒表达系统 | 第35-38页 |
| ·腺病毒的基本结构 | 第35-36页 |
| ·腺病毒的感染机制 | 第36页 |
| ·腺病毒作为载体的发展 | 第36-37页 |
| ·应用腺病毒表达系统表达外源基因的优点 | 第37-38页 |
| ·在AdEasy 腺病毒载体系统操作过程需注意一些问克题 | 第38页 |
| ·腺病毒载体的发展前景 | 第38页 |
| ·论文设计思路及技术路线 | 第38-40页 |
| 第四章 陕西7 个地区猪圆环病毒2 型（PCV2）感染的的血清学调查 | 第40-45页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41页 |
| ·血清PCV2 抗体检测结果与分析 | 第41页 |
| ·部分血清样品PRV 抗体检测结果及分析 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-45页 |
| 第五章 猪圆环病毒2 型陕西株的分离与鉴定 | 第45-51页 |
| ·试剂与材料 | 第45页 |
| ·试剂与细胞系 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-46页 |
| ·病料的采集和处理 | 第45页 |
| ·病料的PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·病毒分离 | 第46-47页 |
| ·细胞的复苏与培养 | 第46-47页 |
| ·病毒接种细胞及传代 | 第47页 |
| ·PCR 检测 | 第47页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第47-48页 |
| ·滴片的制备 | 第47-48页 |
| ·染色 | 第48页 |
| ·结果判定标准 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·样品的采集 | 第48页 |
| ·PCR 检测 | 第48页 |
| ·病毒分离 | 第48-49页 |
| ·PCR 检测 | 第49页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第六章 猪圆环病毒2 型SX 株ORF2 基因的克隆与序列分析 | 第51-57页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·病毒、质粒和菌种 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·模板的制备 | 第51-52页 |
| ·ORF2 基因的扩增及其克隆 | 第52页 |
| ·序列分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-54页 |
| ·ORF2 基因的PCR 扩增 | 第52页 |
| ·重组质粒的筛选结果 | 第52-53页 |
| ·测序结果及核苷酸序列同源性分析 | 第53页 |
| ·SX 株ORF2 基因编码的氨基酸抗原性和亲水性分析（结果见图6－5 与图6－60） | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第七章 猪圆环病毒2 型（PCV2）ORF2 基因的克隆表达与间接 ELISA 检测方法研究 | 第57-71页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·宿主菌、质粒及PCV2 参考血清 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·主要药品及试剂 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-65页 |
| ·目的片段的扩增、纯化与回收 | 第58-59页 |
| ·目的基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第60-62页 |
| ·ORF2 基因原核表达载体的构建 | 第62页 |
| ·重组融合蛋白pBAD/gIII-ORF2 的诱导表达及检测 | 第62-65页 |
| ·重组蛋白的纯化与复性及ELISA 方法的建立 | 第65-66页 |
| ·重组融合蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·纯化蛋白的复性 | 第65-66页 |
| ·ELISA 方法的建立 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-69页 |
| ·PCR 扩增 | 第66页 |
| ·重组质粒pBAD/gⅢ-ORF2 的酶切和PCR 鉴定 | 第66-67页 |
| ·ORF2 表达产物的SDS-PAGE 检测和Western blot 分析 | 第67页 |
| ·表达产物的纯化及复性 | 第67-68页 |
| ·ELISA 方法的建立 | 第68-69页 |
| ·特异性鉴定 | 第69页 |
| ·临床送检血清的ELISA 检测 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 第八章 猪圆环病毒2 型 ORF1、ORF2 基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果研究 | 第71-78页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-73页 |
| ·重组腺病毒免疫效果研究 | 第73页 |
| ·重组腺病毒的制备及滴度测定 | 第73页 |
| ·动物免疫 | 第73页 |
| ·小鼠血清中PCV2 特异性IgG 抗体的测定 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-77页 |
| ·PCV2 ORF1、ORF2 基因的PCR 扩增结果 | 第73页 |
| ·pMD18-ORF1-ORF2 质粒的酶切鉴定 | 第73页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-ORF1-ORF2 的鉴定 | 第73-74页 |
| ·重组腺病毒质粒pAdTracK-CMV- ORF1-ORF2 的酶切鉴定 | 第74页 |
| ·重组腺病毒的鉴定 | 第74-76页 |
| ·重组腺病毒免疫小鼠后抗体的检测 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| 第九章 猪圆环病毒2 型（PCV2）DNA 疫苗的研究 | 第78-94页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·菌种、质粒、细胞和动物 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·主要仪器及器材 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-83页 |
| ·含PCV2 ORF2 基因的DNA 疫苗的构建 | 第79-80页 |
| ·DNA 疫苗的制备 | 第80-81页 |
| ·DNA 疫苗的定量 | 第81页 |
| ·小鼠的免疫 | 第81-82页 |
| ·DNA 疫苗引发特异性体液免疫反应的抗体效价的检测 | 第82页 |
| ·小鼠脾T 淋巴细胞的制备 | 第82页 |
| ·MTT 法体外检测淋巴细胞增殖 | 第82-83页 |
| ·自然杀伤细胞活性(NK)检测 | 第83页 |
| ·T 细胞亚群的测定 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-90页 |
| ·PCR 扩增MPG-ORF2 基因的鉴定 | 第83页 |
| ·pAdTrack-CMV-MPG-ORF2 的酶切及PCR 鉴定 | 第83页 |
| ·pcrCMV-MPG-ORF2-SV40end 扩增的鉴定 | 第83-85页 |
| ·Pmd18-T-CMV-MPG-ORF2-SV40end 的酶切鉴定 | 第85页 |
| ·目的DNA 疫苗的制备 | 第85页 |
| ·目的 DNA 疫苗稳定性的鉴定 | 第85-86页 |
| ·DNA 疫苗诱导小鼠产生的特异性抗体反应 | 第86-88页 |
| ·DNA 疫苗免疫小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应 | 第88页 |
| ·DNA 疫苗免疫小鼠自然杀伤细胞活性（NK）检测 | 第88-89页 |
| ·DNA 疫苗免疫小鼠脾脏中淋巴细胞亚群含量分析 | 第89-90页 |
| ·讨论与结论 | 第90-94页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·结论 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
