| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| ·引言 | 第14-15页 |
| ·ALA的应用领域和市场前景 | 第15-19页 |
| ·ALA在医学领域的应用价值 | 第15-17页 |
| ·ALA在农业领域的应用价值 | 第17-18页 |
| ·ALA的开发利用前景 | 第18-19页 |
| ·生物体内合成ALA的代谢途径 | 第19-21页 |
| ·生物合成ALA的研究进展 | 第21-23页 |
| ·诱变育种法在ALA生物合成中的应用 | 第21-22页 |
| ·代谢工程技术在ALA生物合成中的应用 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌的密码子偏爱性和外源基因的表达 | 第23-25页 |
| ·基因工程菌培养的代谢调控策略 | 第25-26页 |
| ·λ噬菌体Red同源重组技术 | 第26-30页 |
| ·Red同源重组工程 | 第26-28页 |
| ·Red同源重组系统的应用方法 | 第28-29页 |
| ·Red同源重组的应用领域 | 第29-30页 |
| ·本工作的研究基本思路及拟研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-46页 |
| ·菌株与质粒 | 第32-33页 |
| ·仪器与试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基和培养条件 | 第34页 |
| ·类球红细菌基因组的提取 | 第34-35页 |
| ·实验及分析检测方法 | 第35-46页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第35页 |
| ·pH测定 | 第35页 |
| ·细胞密度的测定 | 第35页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第35-36页 |
| ·AKA合成酶比活力的测定 | 第36-37页 |
| ·ALA脱水酶比活力的测定 | 第37页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸(ALA)的分析测定 | 第37-46页 |
| 第三章 产ALA工程菌的构建与优化表达 | 第46-84页 |
| ·引言 | 第46-48页 |
| ·材料和方法 | 第48-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第48-49页 |
| ·基本塔养条件 | 第49-50页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第50页 |
| ·质料DNA提取及转化 | 第50页 |
| ·重组类球红细菌hemA基因表达质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·琥珀酸脱氢酶缺陷型大肠杆菌MG1655(sdh AB~-)的构建 | 第52-54页 |
| ·必须基因的改造和ALA脱水酶基因的替换 | 第54-58页 |
| ·产ALA工程菌的获得 | 第58页 |
| ·产ALA工程菌的培养条件 | 第58-59页 |
| ·分析检测方法 | 第59页 |
| ·响应面试验设计 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-81页 |
| ·重组菌的初步构建和ALA的生产 | 第59-65页 |
| ·利用高温菌进行ALA脱水酶基因的替换 | 第65-72页 |
| ·优化型重组菌的构建和ALA合成酶基因的高效表达 | 第72-81页 |
| ·小结 | 第81-84页 |
| 第四章 工程菌产ALA的放大培养和流加发酵研究 | 第84-96页 |
| ·引言 | 第84-85页 |
| ·材料和方法 | 第85-86页 |
| ·菌株 | 第85页 |
| ·主要培养基及培养条件 | 第85-86页 |
| ·分析检测方法 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-94页 |
| ·葡萄糖或甘氧酸的添加对于批次培养合成ALA的影响 | 第86-88页 |
| ·前体物的连续流加对于ALA合成的影响 | 第88-91页 |
| ·两阶段pH控制的流加策略对于ALA合成的影响 | 第91-94页 |
| ·小结 | 第94-96页 |
| 第五章 重组放射形土壤杆菌hemA基因表达和ALA的高效合成 | 第96-110页 |
| ·引言 | 第96-98页 |
| ·材料和方法 | 第98-99页 |
| ·菌株和质粒 | 第98页 |
| ·培养条件 | 第98-99页 |
| ·分析检测方法 | 第99页 |
| ·结果与讨论 | 第99-107页 |
| ·ALA合成酶表送条件的优化 | 第99-101页 |
| ·ALA合成酶基因在大扬杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中表达的比较 | 第101-103页 |
| ·前体物和葡萄糖对于工程菌产ALA的影响 | 第103-106页 |
| ·工程菌合成ALA的放大实验 | 第106-107页 |
| ·小结 | 第107-110页 |
| 第六章 ALA合成酶酶学性质的研究及工程菌合成ALA的强化 | 第110-124页 |
| ·引言 | 第110-111页 |
| ·材料和方法 | 第111-113页 |
| ·菌株 | 第111页 |
| ·ALA合成酶的表达条件和ALA合成酶的分离纯化 | 第111页 |
| ·分析检测方法 | 第111-112页 |
| ·ALA合成酶的基本酶学性质测定 | 第112-113页 |
| ·ALA脱水酶的分离纯化 | 第113页 |
| ·工程菌的放大培养 | 第113页 |
| ·结果与讨论 | 第113-123页 |
| ·合成酶的分离纯化 | 第113-114页 |
| ·重组ALA合成酶的基本酶学性质 | 第114-116页 |
| ·不同化学试剂和离子强度对于ALA合成酶活力的影响 | 第116-118页 |
| ·不同糖类化合物对于ALA合成酶和ALA脱水酶活力的影响 | 第118-121页 |
| ·新的ALA脱水酶抑制剂用于ALA的生产 | 第121-123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 第七章 结论与展望 | 第124-128页 |
| ·结论 | 第125页 |
| ·展望 | 第125-128页 |
| 参考文献 | 第128-138页 |
| 作者简历 | 第138-139页 |
