| 内容提要 | 第1-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-19页 |
| ·乙酰辅酶A 羧化酶简介 | 第7页 |
| ·ACCase 的分布及类型 | 第7-10页 |
| ·ACCase 的结构 | 第10-13页 |
| ·ACCase 的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·ACCase CT 功能域抑制剂 | 第14-16页 |
| ·本论文的研究背景及实验设计 | 第16-19页 |
| 第二章 小麦质体 ACCASE CT 功能域截短序列在 E.COLI 中的克隆表达 | 第19-35页 |
| 第1节 实验材料 | 第20-22页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第20-21页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第21页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第21-22页 |
| 第2节 实验方法 | 第22-29页 |
| ·大量目的基因片段的获得 | 第22-25页 |
| ·构建表达载体 | 第25-27页 |
| ·转化表达宿主菌及诱导表达 | 第27-28页 |
| ·优化目的蛋白表达 | 第28-29页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第29-33页 |
| ·T-A 克隆的鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第31-33页 |
| 本章小结 | 第33页 |
| 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 酿酒酵母ACCASE CT 功能域基因在毕赤酵母中的克隆表达 | 第35-48页 |
| 第1节 实验材料 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第36页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第36-37页 |
| 第2节 实验方法 | 第37-42页 |
| ·突变pET28a~+-CT 的获得 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·毕赤酵母的甲醇诱导分泌表达 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳分析 | 第41页 |
| ·表达条件的优化 | 第41页 |
| ·目的蛋白纯化及性质检测 | 第41-42页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第42-45页 |
| ·突变目的基因序列的确定 | 第42页 |
| ·重组质粒pPIC9K-CT 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·酵母转化子营养表型筛选及其鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE 凝胶电泳分析 | 第44-45页 |
| ·不同pH 条件的优化 | 第45页 |
| 本章小结 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 中文摘要 | 第55-58页 |
| ABSTRACT | 第58-60页 |