| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-39页 |
| ·microRNA 研究进展概述 | 第11-28页 |
| ·microRNA 的发现 | 第11页 |
| ·microRNA 的概念及特点 | 第11-14页 |
| ·microRNA 的概念 | 第11页 |
| ·microRNA 的特点 | 第11-13页 |
| ·miRNA 与siRNA 的关系 | 第13-14页 |
| ·microRNA 的生物合成 | 第14-17页 |
| ·microRNA 的产生及加工成熟过程 | 第14-16页 |
| ·动、植物microRNA 的产生过程比较 | 第16-17页 |
| ·microRNA 加工成熟过程中的酶及功能蛋白质 | 第17-19页 |
| ·Drosha 酶 | 第17页 |
| ·Dicer（Dicer-like）酶 | 第17-18页 |
| ·microRNA 加工过程中的辅助蛋白 | 第18-19页 |
| ·Agonaute 蛋白家族 | 第19页 |
| ·microRNA 的作用机制 | 第19-20页 |
| ·miRNA 对靶基因剪切 | 第20页 |
| ·miRNA 的翻译抑制作用 | 第20页 |
| ·miRNA 与转录沉默 | 第20页 |
| ·microRNA 参与的基因表达调控 | 第20-28页 |
| ·microRNA 与植物的生长发育 | 第21-22页 |
| ·miRNA 与生长素信号转导 | 第22-23页 |
| ·microRNA 与植物抗胁迫反应 | 第23-28页 |
| ·microRNA 与氧化胁迫 | 第23-24页 |
| ·microRNA 与营养胁迫 | 第24-26页 |
| ·microRNA 与干旱和盐胁迫 | 第26-27页 |
| ·microRNA 与抗冷胁迫 | 第27页 |
| ·其它非生物胁迫调节下的小分子RNA | 第27-28页 |
| ·microRNA 相关实验方法 | 第28-35页 |
| ·miRNA 的分离 | 第28-31页 |
| ·直接克隆法 | 第28-29页 |
| ·正向遗传学方法 | 第29页 |
| ·生物信息学方法 | 第29-31页 |
| ·miRNA 数据库 | 第29-30页 |
| ·生物信息学方法预测miRNA | 第30-31页 |
| ·miRNA 靶基因的预测及生物学鉴定 | 第31-35页 |
| ·生物信息学 | 第33-35页 |
| ·miRU 法 | 第34页 |
| ·Microlnspector 法 | 第34-35页 |
| ·mRNA 表达芯片 | 第35页 |
| ·miRNA 靶基因的生物学验证 | 第35页 |
| ·microRNA 的启动子研究 | 第35-38页 |
| ·生物信息学研究 | 第36-37页 |
| ·生物学研究 | 第37-38页 |
| ·本课题的目的和意义 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-49页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第39页 |
| ·实验用的引物和寡核苷酸 | 第39-41页 |
| ·实验方法 | 第41-49页 |
| ·拟南芥miRNA 芯片实验 | 第41-42页 |
| ·组织块和细胞RNA 的提取 | 第41页 |
| ·miRNA 的分离 | 第41页 |
| ·miRNA 样品的荧光标记 | 第41-42页 |
| ·杂交与清洗 | 第42页 |
| ·芯片扫描 | 第42页 |
| ·数据分析 | 第42页 |
| ·拟南芥miRNA 表达模式的RT-PCR 半定量检测 | 第42-43页 |
| ·拟南芥miRNA 启动子的克隆 | 第43-46页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第43-44页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第45-46页 |
| ·拟南芥转化表达载体的构建 | 第46页 |
| ·植物表达载体的转化 | 第46-47页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第46-47页 |
| ·农杆菌的培养 | 第47页 |
| ·农杆菌介导转化拟南芥 | 第47页 |
| ·转基因植物的GUS 组织化学染色分析 | 第47-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-62页 |
| ·拟南芥miRNA 表达芯片分析 | 第49-53页 |
| ·胁迫响应miRNA 的获得 | 第50-53页 |
| ·胁迫响应miRNA 的分类 | 第53页 |
| ·芯片结果验证 | 第53-54页 |
| ·胁迫诱导miRNA 时序性表达分析 | 第54-55页 |
| ·miRNA 基因前体上游序列分析 | 第55-56页 |
| ·胁迫诱导miRNA 的启动子分析 | 第56-62页 |
| ·miRNA 上游序列的分离和表达载体构建 | 第56-57页 |
| ·转基因拟南芥的获得 | 第57-62页 |
| ·miRNA 基因上游序列具有启动子活性 | 第57-58页 |
| ·miRNA 基因启动子调控模式分析 | 第58-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| ·外源环境胁迫可以诱导miRNA 的表达 | 第62-63页 |
| ·miRNA 可以同时参与植物的生长发育过程和胁迫响应过程 | 第63-64页 |
| ·胁迫诱导miRNA 的表达模式可能与其启动子中富含的胁迫响应元件有关 | 第64页 |
| ·miRNA 上游序列具有启动子活性 | 第64-65页 |
| ·miRNA 启动子可能具有和功能基因启动子类似的调控模式 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-80页 |
| 7 附录 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文: | 第84页 |
