| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 第一节 高度不饱和脂肪酸 | 第10-11页 |
| 第二节 DHA主要生理功能 | 第11-12页 |
| 第三节 DHA生物合成途径 | 第12-19页 |
| ·由多种脂肪酸延长酶和脱饱和酶参与催化的DHA生物合成途径 | 第12-16页 |
| ·脂肪酸碳链延长酶 | 第13-14页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶 | 第14-15页 |
| ·细胞色素b5 | 第15-16页 |
| ·Polyketide synthase(PKS)DHA生物合成途径 | 第16-17页 |
| ·破囊壶菌Thraustochytrium sp.FJN-10中的DHA生物合成途径 | 第17-19页 |
| 第四节 DHA的生产现状 | 第19-20页 |
| ·DHA传统来源 | 第19-20页 |
| ·液体深层发酵生产DHA | 第20页 |
| ·转基因生产DHA | 第20页 |
| 第五节 本课题研究的目的和意义 | 第20-23页 |
| 第六节 本课题研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 共表达质粒pYFTD5-FAD4的构建 | 第24-34页 |
| 第一节 前言 | 第24页 |
| 第二节 材料和方法 | 第24-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·特异引物的设计 | 第24-25页 |
| ·FTD5-CYTT片段和PGAL片段的克隆 | 第25页 |
| ·FTD5-CYTT-PGAL片段的构建 | 第25-27页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4的构建 | 第27-29页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4的转化和菌落PCR验证 | 第29页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4的提取和酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 第三节 结果与分析 | 第30-33页 |
| ·FTD5-CYTT片段和PGAL片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·FTD5-CYTT-PGAL片段的构建 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR验证 | 第32页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4的酶切验证 | 第32-33页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 共表达质粒pYFTD5-FAD4在酿酒酵母中的表达 | 第34-42页 |
| 第一节 前言 | 第34页 |
| 第二节 材料和方法 | 第34-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第34页 |
| ·脂肪酸标准品 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞制备及转化 | 第34-35页 |
| ·重组工程菌株的诱导表达 | 第35页 |
| ·总脂肪酸提取 | 第35页 |
| ·GC-MS分析 | 第35-36页 |
| ·重组工程菌稳定性鉴定 | 第36页 |
| 第三节 结果和分析 | 第36-39页 |
| ·重组工程菌的菌落PCR鉴定 | 第36页 |
| ·工程菌的表达结果 | 第36-38页 |
| ·脂肪酸转化效率 | 第38-39页 |
| ·重组工程菌的稳定性 | 第39页 |
| 第四节 小结和讨论 | 第39-42页 |
| 第四章 共表达质粒PYFTD5-FAD4-B5构建 | 第42-56页 |
| 第一节 前言 | 第42页 |
| 第二节 材料和方法 | 第42-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·酵母DNA的提取 | 第42页 |
| ·特异引物的设计 | 第42-43页 |
| ·细胞色素b5的克隆 | 第43页 |
| ·连接和转化 | 第43页 |
| ·菌落PCR验证 | 第43-44页 |
| ·序列测定和分析 | 第44页 |
| ·质粒pYB5的构建 | 第44页 |
| ·菌落PCR鉴定和质粒提取 | 第44页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4-B5构建 | 第44-47页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4-B5的转化和菌落PCR鉴定 | 第47页 |
| ·共表达质粒pYFTD5-FAD4-B5酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 第三节 结果与分析 | 第48-53页 |
| ·酿酒酵母DNA的提取和检测 | 第48页 |
| ·酵母细胞色素b5的克隆 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第49页 |
| ·序列测定和同源性分析 | 第49-51页 |
| ·pYB5质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| ·共表达质粒的构建和酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 共表达质粒pYFTD5-FAD4-B5在酿酒酵母中的表达 | 第56-64页 |
| 第一节 前言 | 第56页 |
| 第二节 材料和方法 | 第56-57页 |
| ·菌株和质粒 | 第56页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第56页 |
| ·脂肪酸标准品 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞制备及转化 | 第56页 |
| ·酿酒酵母诱导表达 | 第56页 |
| ·总脂肪酸提取 | 第56页 |
| ·GC-MS分析 | 第56-57页 |
| ·重组工程菌稳定性分析 | 第57页 |
| 第三节 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·重组酿酒酵母工程菌的构建 | 第57-58页 |
| ·工程菌的诱导表达结果 | 第58-60页 |
| ·脂肪酸转化效率 | 第60-61页 |
| ·重组工程菌稳定性结果 | 第61-62页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 结论 | 第64-66页 |
| 附录 主要符号对照表 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 个人简历 | 第76-78页 |
