| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-37页 |
| ·抗生素的使用及其危害 | 第16-18页 |
| ·抗生素在医疗中的应用 | 第16-17页 |
| ·抗生素在农业和畜牧业中的应用 | 第17-18页 |
| ·滥用抗生素的危害 | 第18-20页 |
| ·抗生素残留 | 第18页 |
| ·耐药菌的出现 | 第18-20页 |
| ·细菌的耐药基因传播元件 | 第20-27页 |
| ·转座子介导的耐药基因传播 | 第20-22页 |
| ·质粒介导的耐药性 | 第22-23页 |
| ·整合子系统介导的耐药性 | 第23-27页 |
| ·RNAi——抑制耐药基因水平传播新途径 | 第27-35页 |
| ·RNAi的发现 | 第27-28页 |
| ·RNAi的作用机制及特点 | 第28-31页 |
| ·siRNA的制备方法 | 第31-34页 |
| ·RNAi在原核生物细胞中的应用前景 | 第34-35页 |
| ·本项目的研究意义和必要性 | 第35-37页 |
| 第二章 整合子介导的耐药基因体外水平传播 | 第37-58页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·实验材料与设备 | 第38-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·实验质粒和菌株 | 第39-40页 |
| ·实验引物 | 第40页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第40-42页 |
| ·实验过程与方法 | 第42-50页 |
| ·实验流程 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·体外耐药基因水平传播实验 | 第46页 |
| ·PCR验证整合菌株 | 第46-49页 |
| ·DNA测序及序列解析 | 第49-50页 |
| ·整合率的测定 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-57页 |
| ·转化R388 进入BL21(DE3)中 | 第50-51页 |
| ·转化pGC系列质粒进入DH5α中 | 第51-52页 |
| ·接合实验 | 第52-53页 |
| ·实验PCR扩增结果 | 第53-54页 |
| ·耐药基因盒体外整合实验PCR扩增产物测序比对结果分析 | 第54-56页 |
| ·整合效率的测定 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 整合子介导的耐药基因在体内小鼠肠道中的传播 | 第58-75页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·实验材料与设备 | 第59-61页 |
| ·主要仪器设备 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·实验质粒和菌株 | 第60页 |
| ·实验引物 | 第60页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第60-61页 |
| ·实验流程 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-64页 |
| ·实验对象分组 | 第61-62页 |
| ·接种 | 第62页 |
| ·小鼠一般表现观察 | 第62页 |
| ·收集样本 | 第62页 |
| ·提取质粒 | 第62-63页 |
| ·耐药基因盒的体内整合实验 | 第63页 |
| ·整合产物的PCR验证 | 第63页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第63页 |
| ·DNA测序及其序列分析 | 第63-64页 |
| ·整合率的测定 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-73页 |
| ·筛选合格小鼠 | 第64-66页 |
| ·供体菌在小鼠肠道中定殖验证 | 第66-67页 |
| ·接合菌株质粒提取 | 第67-68页 |
| ·耐药基因盒在小鼠肠道整合实验PCR扩增结果 | 第68-70页 |
| ·PCR扩增产物测序比对结果分析 | 第70-71页 |
| ·整合菌株在小鼠肠道中的稳定性 | 第71-72页 |
| ·耐药基因在体内和体外的整合效率比较 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 第四章 siRNA干扰整合子介导的耐药基因水平传播效率 | 第75-86页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·实验材料与设备 | 第76-78页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76-77页 |
| ·实验引物 | 第77页 |
| ·实验质粒和菌株 | 第77页 |
| ·siRNA实验原理 | 第77-78页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第78页 |
| ·实验过程和方法 | 第78-81页 |
| ·siRNA的设计 | 第78-80页 |
| ·实验流程 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80页 |
| ·抗生素筛选 | 第80-81页 |
| ·PCR验证 | 第81页 |
| ·整合率的测定 | 第81页 |
| ·siRNA的抑制效率 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-84页 |
| ·筛选高活性siRNA | 第81-82页 |
| ·siRNA的使用量 | 第82-83页 |
| ·siRNA的加入方式 | 第83-84页 |
| ·共培养时间 | 第84页 |
| ·本章小结 | 第84-86页 |
| 第五章 Real-time PCR检测siRNA对整合效率和intI1 mRNA水平的影响 | 第86-102页 |
| ·引言 | 第86页 |
| ·实验设备与材料 | 第86-89页 |
| ·主要材料与设备 | 第86-87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第87-88页 |
| ·实验引物和实验用siRNA | 第88页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第88-89页 |
| ·实验流程 | 第89-90页 |
| ·实验前准备 | 第89-90页 |
| ·实验流程 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-94页 |
| ·质粒标准品的构建 | 第90-93页 |
| ·RNA的提取 | 第93页 |
| ·总质粒的提取 | 第93页 |
| ·Real-time PCR | 第93-94页 |
| ·结果与讨论 | 第94-100页 |
| ·总RNA的提取 | 第94-95页 |
| ·相对定量检测siRNA对整合效率的影响 | 第95-96页 |
| ·siRNA对intI1 mRNA水平的影响 | 第96页 |
| ·绝对定量测定整合效率 | 第96-100页 |
| ·本章小结 | 第100-102页 |
| 结论与展望 | 第102-105页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 创新点 | 第103-104页 |
| 展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
