| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 Ghrelin及其受体GHSR在前列腺癌中的表达 | 第17-28页 |
| 1. 材料和方法 | 第17-23页 |
| ·前列腺癌细胞系及人类前列腺癌组织 | 第17-18页 |
| ·半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第18-20页 |
| ·细胞及组织RNA样本提取 | 第18页 |
| ·第一链cDNA合成(20μl反应体系) | 第18-19页 |
| ·cDNA序列扩增(50μl反应体系) | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
| ·蛋白免疫印迹(Western blot) | 第20-23页 |
| ·细胞及组织蛋白质样本提取 | 第20-21页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第21页 |
| ·转膜 | 第21页 |
| ·Ghrelin受体GHSR的免疫检测 | 第21-22页 |
| ·ECL化学发光,显影和定影 | 第22页 |
| ·膜再生 | 第22页 |
| ·β-Actin免疫检测 | 第22页 |
| ·ECL化学发光,显影和定影 | 第22-23页 |
| ·统计学分析 | 第23页 |
| 2. 结果 | 第23-25页 |
| ·前列腺癌中Ghrelin及GHSR的mRNA表达 | 第23-24页 |
| ·前列腺癌中GHSR的蛋白表达 | 第24-25页 |
| 3. 讨论 | 第25-27页 |
| 4. 结论 | 第27-28页 |
| 第二章 Ghrelin类似物的合成及半抗原FITC的标记 | 第28-40页 |
| 1. 材料和方法 | 第28-35页 |
| ·Ghrelin类似物的设计 | 第28-30页 |
| ·试剂与设备 | 第30-31页 |
| ·多肽链的组装 | 第31-32页 |
| ·多肽链的侧链修饰及树脂裂解 | 第32-34页 |
| ·半抗原FITC(异硫氰酸荧光素)标记多肽链 | 第34-35页 |
| ·多肽的准备 | 第34页 |
| ·FITC的准备 | 第34页 |
| ·结合 | 第34页 |
| ·透析 | 第34页 |
| ·凝胶柱层析 | 第34-35页 |
| 2. 结果 | 第35-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-39页 |
| 4. 结论 | 第39-40页 |
| 第三章 Ghrelin类似物探针对前列腺肿瘤GHSR的识别 | 第40-59页 |
| 1. 材料和方法 | 第40-47页 |
| ·前列腺癌细胞系PC-3的细胞爬片 | 第40-41页 |
| ·人类前列腺癌组织的冰冻切片 | 第41-42页 |
| ·Ghrelin类似物探针对PC-3细胞及人类前列腺组织GHSR的标记 | 第42-43页 |
| ·FITC-Ghrelin(1-19)结合GHSR的竞争性抑制实验 | 第43-44页 |
| ·FITC-Ghrelin(1-19)结合GHSR的内化(Internalization)抑制实验 | 第44页 |
| ·FITC-Ghrelin(1-19)探针信号的定量分析 | 第44-45页 |
| ·统计学分析 | 第45-47页 |
| 2. 结果 | 第47-55页 |
| ·Ghrelin类似物探针对PC-3细胞的标记为GHSR依赖的特异性结合 | 第47-49页 |
| ·Ghrelin类似物探针结合GHSR后通过内化作用进入PC-3细胞内 | 第49-51页 |
| ·Ghrelin类似物探针能够对不同病理改变的前列腺组织进行区分 | 第51-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-57页 |
| 4. 结论 | 第57-59页 |
| 第四章 活体模型内Ghrelin类似物对前列腺癌生长的影响 | 第59-72页 |
| 1. 材料和方法 | 第59-64页 |
| ·表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的前列腺癌细胞PC-3-GFP的建立 | 第59-61页 |
| ·活体模型内Ghrelin类似物对前列腺癌PC-3-GFP细胞生长的干预 | 第61-62页 |
| ·活体模型内前列腺癌PC-3-GFP细胞生长情况的观察及肿瘤组织采集 | 第62页 |
| ·人类alu实时定量PCR分析 | 第62-63页 |
| ·肿瘤组织DNA样本提取 | 第62-63页 |
| ·人类alu DNA序列扩增 | 第63页 |
| ·人类alu常规PCR分析 | 第63-64页 |
| ·统计学分析 | 第64页 |
| 2. 结果 | 第64-69页 |
| ·表达绿色荧光蛋白的前列腺癌PC-3-GFP细胞 | 第64-65页 |
| ·前列腺癌PC-3-GFP细胞在禽胚胎CAM内的生长 | 第65-67页 |
| ·Ghrelin(1-18)对前列腺癌PC-3-GFP细胞在CAM模型内的生长影响 | 第67-69页 |
| 3. 讨论 | 第69-71页 |
| 4. 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 综述 | 第78-101页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第102页 |
