| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·RNAi 技术 | 第12-18页 |
| ·RNAi 的发现 | 第12-13页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第13-14页 |
| ·RNAi 诱导特异性基因沉默的特点 | 第14-15页 |
| ·RNAi 技术的应用 | 第15-16页 |
| ·RNAi 存在问题 | 第16-18页 |
| ·避免干扰素反应的RNA 聚合酶Ⅱ启动驱动表达长dsRNA 的理论基础 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·质粒、菌株及细胞系 | 第21页 |
| ·药品和酶 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·序列及PCR 引物合成 | 第23-24页 |
| ·分析工具软件 | 第24页 |
| ·试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·避免干扰素反应RNA 聚合酶II 驱动表达长dsRNA 的RNA 干扰载体的设计 | 第25-26页 |
| ·减速序列（Human β-actin gene）基因的PCR 扩增 | 第26页 |
| ·合成的发卡状核酶基因的退火，互补成双链DNA 片段 | 第26-27页 |
| ·克隆到pBluescript II Sk 载体中的HDV 序列质粒的提取 | 第27页 |
| ·PCR 产物的回收与克隆 | 第27-28页 |
| ·重组克隆质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·序列测定与分析 | 第29页 |
| ·RNAi 干扰载体的构建 | 第29-31页 |
| ·RNAi 干扰对照载体的构建 | 第31页 |
| ·转染用DNA 制备 | 第31-32页 |
| ·PK15 细胞培养 | 第32-33页 |
| ·细胞转染 | 第33页 |
| ·用于PCR 扩增和RT-PCR 引物的初步检测 | 第33-34页 |
| ·半定量RT-PCR 检测细胞质中的mRNA 含量 | 第34-36页 |
| 3 结果 | 第36-60页 |
| ·减速序列（Human β-actin gene）基因的PCR 扩增 | 第36页 |
| ·合成的发卡状核酶基因的退火，互补成双链DNA 片段 | 第36-37页 |
| ·设计改造后合成的HDV 核酶序列的测序结果 | 第37页 |
| ·RNAi 载体的构建过程及鉴定 | 第37-49页 |
| ·pcDNAHDVCoTC 载体的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·pcDNAHDVCoTC-5RZ 载体的构建及鉴定 | 第38-40页 |
| ·pcDNAHDVCoTC-5RZ-ACTPs 载体的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·pcDNAHDVCoTC-5RZ-PA-ACTP 载体的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·pcDNAHDVCoTC-5RZ-PA-3RZ-ACTP 载体的构建及鉴定 | 第42-45页 |
| ·Psv40Neo 载体的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·RNA 干扰用PMCSHDVCoT-5RZ-PA-3RZ-ACTP 载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·携带增强型绿色荧光蛋白（eGFP）报告基因RNA 干扰用载体构建及鉴定 | 第47-49页 |
| ·RNAi 干扰对照载体的构建 | 第49-51页 |
| ·表达红色荧光蛋白基因（RFP）：PIR-RFP 载体构建及鉴定 | 第49-50页 |
| ·表达绿色荧光蛋白基因（eGFP）：pattB-ins-cubc-GHPA 载体构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·转染用 DNA 制备 | 第51-52页 |
| ·无内毒素转染质粒提取 | 第51页 |
| ·无内毒素转染质粒OD 值及含量的测定 | 第51-52页 |
| ·细胞转染 | 第52-53页 |
| ·观察荧光细胞的转染结果 | 第52-53页 |
| ·细胞核和细胞质RNA 的提取结果 | 第53页 |
| ·细胞核和细胞质RNA 的浓度测定结果 | 第53页 |
| ·半定量实验结果 | 第53-60页 |
| ·最佳PCR 条件的建立 | 第53-56页 |
| ·半定量RT-PCR 扩增结果 | 第56-58页 |
| ·应用定量分析软件分析各组细胞质中mRNA 的含量 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| ·应用RNA 聚合酶Ⅱ启动子，在体内进行RNAi 的依据 | 第60-61页 |
| ·在细胞核内表达长dsRNA，有效避免干扰素反应的依据 | 第61页 |
| ·RNAi 载体功能的初步检测及分析 | 第61-64页 |
| ·转染细胞的荧光观察与分析 | 第62页 |
| ·半定量RT-PCR 检测细胞质中m RNA 的表达含量结果及分析 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 在读期间发表的论文 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
