| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 目录 | 第15-19页 |
| 1 绪论 | 第19-51页 |
| ·双生病毒的特征及其致病的分子机制 | 第19-36页 |
| ·双生病毒的基本特性 | 第19-20页 |
| ·双生病毒的流行与危害 | 第20-22页 |
| ·双生病毒的基因组及其编码的蛋白 | 第22-25页 |
| ·双生病毒卫星betasatellite分子的发现及其作用 | 第25-26页 |
| ·双生病毒致病性相关基因及其分子机制 | 第26-35页 |
| ·结语 | 第35-36页 |
| ·植物SnRK1研究进展 | 第36-51页 |
| ·植物SnRK1的发现 | 第36-37页 |
| ·SnRK1的分类 | 第37-38页 |
| ·SnRK1复合体的结构 | 第38-45页 |
| ·SnRK1的活性调节 | 第45-47页 |
| ·SnRK1的底物识别序列 | 第47页 |
| ·SnRK1的下游底物及其功能 | 第47-50页 |
| ·结语 | 第50-51页 |
| 2 与TYLCCNB βC1蛋白互作的番茄寄主因子的筛选 | 第51-66页 |
| ·材料与方法 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·诱饵蛋白毒性及自激活检测 | 第52-53页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第53-58页 |
| ·BiFC实验 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-62页 |
| ·βC1蛋白对酵母毒性及其自激活活性的检测 | 第59-60页 |
| ·与βC1蛋白互作的番茄寄主因子筛选 | 第60-61页 |
| ·酵母双杂交验证SlSnRK1与βC1蛋白的互作 | 第61-62页 |
| ·BiFC验证SlSnRK1与βC1蛋白在植物体内的互作 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-66页 |
| ·酵母双杂交系统的选择 | 第63-64页 |
| ·与βC1蛋白互作的番茄寄主因子的筛选 | 第64-66页 |
| 3 番茄SlSnRK1的性质研究 | 第66-78页 |
| ·材料与方法 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·载体构建 | 第67页 |
| ·同源序列比对及其保守功能域的分析 | 第67-68页 |
| ·农杆菌浸润接种和侵染性克隆的接种 | 第68页 |
| ·共聚焦显微镜观察GFP荧光并拍照 | 第68页 |
| ·半定量RT-PCR和real-time RT-PCR分析 | 第68-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-77页 |
| ·SlSnRK1蛋白与其他SNF1类激酶的相似性比较及其保守功能域分析 | 第70-73页 |
| ·SlSnRK1的亚细胞定位分析 | 第73-74页 |
| ·SlSnRK1组织特异性表达分析 | 第74-75页 |
| ·TYLCCNV/TYLCCNB侵染对SlSnRK1 mRNA积累量的影响 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| 4 植物SnRK1对TYLCCNV/TYLCCNB致病性的影响 | 第78-84页 |
| ·材料与方法 | 第78-80页 |
| ·材料 | 第78页 |
| ·基因克隆和载体构建 | 第78-79页 |
| ·酵母双杂交验证 | 第79-80页 |
| ·侵染性克隆的接种 | 第80页 |
| ·病毒侵染过程的观察及侵染效率的统计分析 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-84页 |
| 5 βC1蛋白与SlSnRK1互作的机理研究 | 第84-108页 |
| ·材料与方法 | 第84-91页 |
| ·菌株和质粒 | 第84页 |
| ·Over-lap PCR | 第84-85页 |
| ·载体构建 | 第85-88页 |
| ·酵母互补/抑制实验 | 第88-89页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第89页 |
| ·GST融合蛋白的纯化、脱盐和浓缩 | 第89-90页 |
| ·纯化蛋白GST标签的切除 | 第90页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第90页 |
| ·体外磷酸化实验 | 第90-91页 |
| ·蛋白磷酸化位点及体外磷酸化强度的定量分析 | 第91页 |
| ·结果与分析 | 第91-104页 |
| ·酵母互补/抑制实验 | 第91-94页 |
| ·TYLCCNB βC1蛋白磷酸化位点的生物信息学分析 | 第94-96页 |
| ·融合蛋白的表达纯化 | 第96页 |
| ·TYLCCNB βC1蛋白是番茄SlSnRK1的磷酸化底物 | 第96-101页 |
| ·SlSnRK1特异磷酸化TYLCCNB βC1蛋白的33-Ser和78-Thr位点 | 第101-104页 |
| ·讨论 | 第104-108页 |
| 6 βC1蛋白的磷酸化对TYLCCNV/TYLCCNB致病性的影响 | 第108-117页 |
| ·材料与方法 | 第108-111页 |
| ·病毒和植物材料 | 第108-109页 |
| ·菌株和质粒 | 第109页 |
| ·磷酸化位点突变的突变体侵染性克隆构建 | 第109-110页 |
| ·突变体侵染性克隆致病性差异分析 | 第110-111页 |
| ·结果与分析 | 第111-114页 |
| ·讨论 | 第114-117页 |
| 7 全文小结与展望 | 第117-119页 |
| ·全文小结 | 第117-118页 |
| ·展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-141页 |
| 附录A:本论文中所用术语缩写词及中英文对照 | 第141-145页 |
| 附录B:本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第145-147页 |
| 附录C:常用培养基及缓冲液配方 | 第147-153页 |
