| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 研究思路与方案 | 第12-13页 |
| 第一章 文献研究 | 第13-29页 |
| 1.1 Hippo信号通路 | 第13-17页 |
| 1.1.1 Hippo信号通路的基本组成 | 第13-16页 |
| 1.1.2 Hippo信号通路的功能 | 第16-17页 |
| 1.2 TEAD-YAP复合物 | 第17-24页 |
| 1.2.1 转录因子TEADs | 第18-19页 |
| 1.2.2 TEAD-YAP蛋白结构研究 | 第19-21页 |
| 1.2.3 TEAD-YAP与肿瘤的关系 | 第21-23页 |
| 1.2.4 TEAD-YAP抑制剂研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 共价药物设计与开发 | 第24-29页 |
| 1.3.1 共价药物靶点结合机理 | 第25-26页 |
| 1.3.2 共价结合药物和天然产物 | 第26-27页 |
| 1.3.3 共价药物选择性 | 第27-29页 |
| 第二章 基于荧光偏振的TEAD-YAP相互作用抑制剂高通量筛选体系建立及先导化合物发现 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 TEAD1 (209-426)蛋白表达载体构建 | 第30-32页 |
| 2.2.2 TEAD1蛋白质表达及纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.3 荧光偏振结合实验方法建立与优化 | 第33页 |
| 2.2.4 高通量化合物筛选 | 第33-34页 |
| 2.2.5 基于AlphaScreen技术的TEAD-YAP互作实验 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-40页 |
| 2.3.1 TEAD1蛋白的表达、纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.2 TEAD1-YAP荧光偏振实验方法的建立 | 第36-38页 |
| 2.3.3 高通量筛选结果 | 第38-40页 |
| 第三章 苗头化合物DC_TEF1的表征与共价设计 | 第40-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 蛋白半胱氨酸定点突变 | 第40-41页 |
| 3.2.2 差示扫描荧光分析法(DSF) | 第41页 |
| 3.2.3 核磁共振实验(NMR) | 第41-42页 |
| 3.2.4 表面等离子共振实验(SPR) | 第42页 |
| 3.2.5 基于“点击化学”的棕榈酰转移酶活性抑制实验 | 第42-43页 |
| 3.2.6 结合模式分析 | 第43-44页 |
| 3.2.7 化学合成与改造 | 第44页 |
| 3.2.8 蛋白质高分辨质谱实验 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-53页 |
| 3.3.1 DC_TEF1的化学生物学表征 | 第45-49页 |
| 3.3.2 共价药物设计与化学生物学表征 | 第49-53页 |
| 第四章 DC_TEF6的抗肿瘤活性与作用机制研究 | 第53-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 萤光素酶报告基因实验(Luciferase Assay) | 第53-54页 |
| 4.2.2 His-tag Pull down实验 | 第54-55页 |
| 4.2.3 均相时间分辨荧光实验(HTRF) | 第55-56页 |
| 4.2.4 细胞增殖及凋亡实验 | 第56-57页 |
| 4.2.5 细胞划痕实验 | 第57页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR实验 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第58-61页 |
| 4.3.1 DC_TEF6在细胞水平破坏TEAD-YAP相互作用 | 第58-59页 |
| 4.3.2 DC_TEF6抑制TEAD转录活性 | 第59页 |
| 4.3.3 DC_TEF6抑制结肠癌细胞增殖、迁移、凋亡 | 第59-60页 |
| 4.3.4 DC_TEF6能下调TEAD下游靶基因水平 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第73-74页 |
| 附件 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
