| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-34页 |
| 1.1 糖与糖生物学 | 第13-14页 |
| 1.2 糖缀合物与糖基转移酶 | 第14-15页 |
| 1.3 唾液酸及其糖缀合物 | 第15-22页 |
| 1.3.1 唾液酸单体 | 第15-17页 |
| 1.3.2 唾液酸缀合物与唾液酸转移酶 | 第17-18页 |
| 1.3.3 唾液酸的正常生理功能 | 第18-21页 |
| 1.3.4 唾液酸与人类疾病的关系 | 第21页 |
| 1.3.5 唾液酸的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 神经细胞黏附因子与多聚唾液酸转移酶 | 第22-25页 |
| 1.5 核磁共振波谱学(NMR)基本原理 | 第25-33页 |
| 1.5.1 核磁共振波谱学在生物大分子的运用概述 | 第25-26页 |
| 1.5.2 NMR用于蛋白质三维结构解析 | 第26-29页 |
| 1.5.3 NMR用于核酸结构解析 | 第29-30页 |
| 1.5.4 NMR用于多肽结构解析 | 第30页 |
| 1.5.5 NMR在生物大分子的动力学分析 | 第30-31页 |
| 1.5.6 NMR在生物大分子相互作用研究中的应用 | 第31-32页 |
| 1.5.7 NMR在其它方面的运用 | 第32-33页 |
| 1.6 本课题研究的目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 材料和方法 | 第34-56页 |
| 2.1 常用菌种与质粒信息 | 第34页 |
| 2.2 菌种保存、培养基和抗生素 | 第34-35页 |
| 2.2.1 菌种保存 | 第34页 |
| 2.2.2 常用培养基 | 第34-35页 |
| 2.2.3 常用抗生素配制方法 | 第35页 |
| 2.3 常用分子生物学方法 | 第35-41页 |
| 2.3.1 常用试剂 | 第35页 |
| 2.3.2 基因克隆 | 第35-40页 |
| 2.3.3 感受态细胞制备与质粒转化 | 第40-41页 |
| 2.4 原核表达载体构建、表达与纯化 | 第41-49页 |
| 2.4.1 PSTD域的原核表达载体构建 | 第41-47页 |
| 2.4.2 表达载体诱导 | 第47-48页 |
| 2.4.3 蛋白纯化 | 第48-49页 |
| 2.4.4 蛋白分子筛纯化 | 第49页 |
| 2.4.5 融合蛋白酶切及其纯化分析 | 第49页 |
| 2.5 圆二色光谱(CD)实验 | 第49-50页 |
| 2.6 等温滴定(ITC)测量 | 第50-51页 |
| 2.7 荧光光谱测定 | 第51页 |
| 2.8 激光拉曼光谱测定 | 第51页 |
| 2.9 生物信息学分析方法 | 第51-52页 |
| 2.9.1 常用软件与数据库 | 第51-52页 |
| 2.9.2 基本方法 | 第52页 |
| 2.10 NMR解析PSTD-22AA肽结构 | 第52-54页 |
| 2.10.1 样品制备 | 第52-53页 |
| 2.10.2 NMR实验 | 第53页 |
| 2.10.3 信号归属 | 第53页 |
| 2.10.4 结构计算 | 第53-54页 |
| 2.11 蛋白模拟分析 | 第54-56页 |
| 2.11.1 同源建模 | 第54页 |
| 2.11.2 PSTD突变模型构建与条件设置 | 第54页 |
| 2.11.3 PSTD与底物分子对接 | 第54-56页 |
| 第三章 ST8SIA家族的进化分析 | 第56-67页 |
| 3.1 引言 | 第56页 |
| 3.2 结果 | 第56-65页 |
| 3.2.1 唾液酸转移酶(GT29)家族的分析 | 第56-58页 |
| 3.2.2 GT-29家族的细菌中的同源序列分析 | 第58-59页 |
| 3.2.3 唾液酸2,8亚家族成员的进化分析 | 第59-62页 |
| 3.2.4 ST8SIA2与ST8SIA4功能分化研究 | 第62-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 ST8SIA4中PSTD区域的NMR结构分析 | 第67-81页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 结果 | 第67-78页 |
| 4.2.1 大肠杆菌表达PSTD区域的实验结果 | 第67-68页 |
| 4.2.2 PSTD-22AA肽的NMR结构解析 | 第68-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 多聚唾液酸PSA与PSTD区域的结合研究 | 第81-91页 |
| 5.1 引言 | 第81页 |
| 5.2 结果 | 第81-89页 |
| 5.2.1 多肽与底物的对接结果 | 第81-86页 |
| 5.2.2 同源模建PSTD结合口袋与底物的对接结果 | 第86-89页 |
| 5.3 讨论 | 第89-91页 |
| 第六章 抑制剂与多聚唾液酸转移酶PSTD域的结合研究 | 第91-107页 |
| 6.1 引言 | 第91页 |
| 6.2 结论 | 第91-103页 |
| 6.2.1 圆二色谱法研究不同底物与PSTD-22AA肽的结合 | 第91-94页 |
| 6.2.2 ITC研究不同底物与PSTD-22AA肽的结合 | 第94-97页 |
| 6.2.3 肝素对PSTD-22AA肽的结合研究 | 第97-99页 |
| 6.2.4 低分子肝素对PSTD-22AA肽的结合研究 | 第99-103页 |
| 6.2.5 肝素与PSTD-22AA肽的结合沉淀物的分析 | 第103页 |
| 6.3 讨论 | 第103-107页 |
| 结论与展望 | 第107-109页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 本文的主要创新点 | 第108页 |
| 本文存在的问题及深入方向 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-120页 |
| 附录 | 第120-139页 |
| 附录一 图谱傅里叶变换脚本 | 第120-124页 |
| 附件二 NMR中常用缩略语表 | 第124-125页 |
| 附录三 天然氨基酸结构及自旋系统示意图 | 第125-126页 |
| 附录四 20种天然氨基酸COSY、TOCSY相关模式 | 第126-127页 |
| 附录五 部分PBR-35AA肽的实验结果 | 第127-132页 |
| 附录六 不同底物与PSTD-22AA肽的对接实验结果 | 第132-134页 |
| 附录七 PSTD功能域中非碱性氨基酸突变子的构建 | 第134-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 攻读学位期间所发表的学术论文和研究成果 | 第140页 |
