| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第1章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 大黄鱼简介 | 第15-16页 |
| 1.1.1 大黄鱼综合概述 | 第15页 |
| 1.1.2 营养和经济价值 | 第15页 |
| 1.1.3 大黄鱼养殖概况 | 第15-16页 |
| 1.1.4 主要病害 | 第16页 |
| 1.2 鱼类免疫系统的研究 | 第16-17页 |
| 1.2.1 免疫组织及免疫器官 | 第16-17页 |
| 1.2.2 免疫应答系统 | 第17页 |
| 1.3 Rab GTPase研究现状 | 第17-20页 |
| 1.3.1 小G蛋白研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Rab GTPase在免疫中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 Rab5A研究现状 | 第19页 |
| 1.3.4 Rab11研究现状 | 第19页 |
| 1.3.5 Rab13研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 本论文研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第2章 Rab5A分子特征和功能研究 | 第21-55页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 免疫刺激剂 | 第21页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂和药品 | 第22页 |
| 2.1.5 其他试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.1.6 引物 | 第23-24页 |
| 2.1.7 仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 总RNA的提取和检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 c DNA第一条链的纯化 | 第25页 |
| 2.2.3 目的片段特异性扩增 | 第25页 |
| 2.2.4 割胶纯化目的片段 | 第25-26页 |
| 2.2.5 质粒提取 | 第26页 |
| 2.2.6 目的基因与质粒的重组 | 第26页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态制备 | 第26-27页 |
| 2.2.8 原核表达目的基因 | 第27-28页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2.10 孵化刺激隐核虫 | 第28页 |
| 2.2.11 刺激隐核虫感染大黄鱼 | 第28页 |
| 2.2.12 免疫攻毒实验 | 第28-29页 |
| 2.2.13 荧光定量PCR反应条件 | 第29页 |
| 2.2.14 重组蛋白纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.15 制备多克隆抗体 | 第30页 |
| 2.2.16 Protein A法纯化抗血清 | 第30-31页 |
| 2.2.17 酶联免疫分析(ELISA) | 第31页 |
| 2.2.18 Western Blot蛋白检测 | 第31-33页 |
| 2.2.19 免疫电镜 | 第33页 |
| 2.2.20 GST pull－down assay | 第33-34页 |
| 2.2.21 蛋白质质谱检测分析 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-54页 |
| 2.3.1 大黄鱼总RNA的提取与检测 | 第34-35页 |
| 2.3.2 大黄鱼Rab5A基因ORF扩增 | 第35页 |
| 2.3.3 Rab5A基因序列特征 | 第35-37页 |
| 2.3.4 大黄鱼Rab5A氨基酸结构及功能分析 | 第37页 |
| 2.3.5 Rab5A的进化分析 | 第37-40页 |
| 2.3.6 熔解曲线分析 | 第40-41页 |
| 2.3.7 大黄鱼Rab5A基因的组织表达谱 | 第41页 |
| 2.3.8 刺激隐核虫感染后大黄鱼Rab5A基因在组织中表达变化 | 第41-42页 |
| 2.3.9 免疫刺激后大黄鱼Rab5A基因组织表达差异情况 | 第42-44页 |
| 2.3.10 大黄鱼Rab5A基因ORF扩增 | 第44页 |
| 2.3.11 pGEX-4T-2 表达质粒提取 | 第44页 |
| 2.3.12 菌落PCR鉴定重组菌株 | 第44-45页 |
| 2.3.13 重组质粒双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.14 菌落测序 | 第46页 |
| 2.3.15 融合蛋白表达的分析 | 第46-47页 |
| 2.3.16 融合蛋白的可溶性分析 | 第47-48页 |
| 2.3.17 融合蛋白纯化 | 第48页 |
| 2.3.18 抗体制备 | 第48-49页 |
| 2.3.19 抗体的效价测定 | 第49-50页 |
| 2.3.20 Western blot鉴定Rab5A蛋白在大黄鱼各组织中的表达谱 | 第50页 |
| 2.3.21 Western blot分析免疫刺激后大黄鱼Rab5A蛋白的表达变化 | 第50-51页 |
| 2.3.22 GST pull-down assay | 第51-52页 |
| 2.3.23 Rab5A互作蛋白质谱分析 | 第52页 |
| 2.3.24 大黄鱼Rab5A蛋白的亚细胞定位 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第3章 Rab11分子特征和功能研究 | 第55-66页 |
| 3.1 材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第55页 |
| 3.1.2 免疫刺激剂 | 第55页 |
| 3.1.3 菌株和质粒 | 第55页 |
| 3.1.4 主要试剂和药品 | 第55页 |
| 3.1.5 其他配制试剂 | 第55页 |
| 3.1.6 引物 | 第55-56页 |
| 3.1.7 仪器设备 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 3.2.1 总RNA的提取和检测 | 第56页 |
| 3.2.2 c DNA第一条链的合成与纯化 | 第56页 |
| 3.2.3 目的片段特异性扩增 | 第56页 |
| 3.2.4 割胶纯化目的片段 | 第56页 |
| 3.2.5 生物信息学分析 | 第56页 |
| 3.2.6 免疫相关研究 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 3.3.1 大黄鱼Rab11基因ORF扩增 | 第57页 |
| 3.3.2 Rab11基因序列特征 | 第57-59页 |
| 3.3.3 大黄鱼Rab11氨基酸结构及功能分析 | 第59页 |
| 3.3.4 Rab11的进化分析 | 第59-61页 |
| 3.3.5 熔解曲线分析 | 第61-62页 |
| 3.3.6 大黄鱼Rab11基因的组织表达谱 | 第62页 |
| 3.3.7 刺激隐核虫感染后大黄鱼Rab11基因在组织中表达变化 | 第62-63页 |
| 3.3.8 免疫刺激后大黄鱼Rab11基因在各组织中差异表达情况 | 第63-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第4章 Rab13分子特征和功能研究 | 第66-79页 |
| 4.1 材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第66页 |
| 4.1.2 免疫刺激剂 | 第66页 |
| 4.1.3 菌株和质粒 | 第66页 |
| 4.1.4 主要试剂和药品 | 第66页 |
| 4.1.5 其他配制试剂 | 第66页 |
| 4.1.6 引物 | 第66-67页 |
| 4.1.7 仪器设备 | 第67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-68页 |
| 4.2.1 总RNA的提取和检测 | 第67页 |
| 4.2.2 cDNA第一条链的纯化 | 第67页 |
| 4.2.3 3'RACE和目的片段特异性扩增 | 第67-68页 |
| 4.2.4 割胶纯化目的片段 | 第68页 |
| 4.2.5 生物信息学分析 | 第68页 |
| 4.2.6 免疫相关研究 | 第68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-78页 |
| 4.3.1 大黄鱼Rab13基因 3` RACE扩增 | 第68-69页 |
| 4.3.2 大黄鱼Rab13基因ORF扩增 | 第69-70页 |
| 4.3.3 Rab13基因序列特征 | 第70-71页 |
| 4.3.4 大黄鱼Rab13氨基酸结构及功能分析 | 第71页 |
| 4.3.5 Rab13的进化分析 | 第71-73页 |
| 4.3.6 熔解曲线分析 | 第73-74页 |
| 4.3.7 大黄鱼Rab13基因的组织表达谱 | 第74-75页 |
| 4.3.8 刺激隐核虫感染后大黄鱼Rab13基因在组织中表达变化 | 第75页 |
| 4.3.9 免疫刺激后大黄鱼Rab13基因在各组织中差异表达情况 | 第75-77页 |
| 4.3.10 亚细胞定位大黄鱼Rab13蛋白 | 第77-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-79页 |
| 第5章 总结 | 第79-81页 |
| 5.1 结论 | 第79页 |
| 5.2 创新点 | 第79页 |
| 5.3 展望 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第89页 |
