| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-22页 |
| 1.1 蓝细菌简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 蓝细菌 | 第10页 |
| 1.1.2 鱼腥蓝细菌 | 第10-11页 |
| 1.1.3 AnabaenaPCC7120的研究概况 | 第11页 |
| 1.2 RNaseE、PNPase、RNA degradosome的研究进展 | 第11-20页 |
| 1.2.1 RNaseE | 第11-14页 |
| 1.2.1.1 RNaseE的一级结构 | 第11-13页 |
| 1.2.1.2 RNaseE的晶体结构 | 第13-14页 |
| 1.2.1.3 RNaseE的酶活 | 第14页 |
| 1.2.2 PNPase | 第14-16页 |
| 1.2.2.1 PNPase结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 PNPase酶活 | 第16页 |
| 1.2.3 RNA degradosome | 第16-20页 |
| 1.2.3.1 E.coli中RNAdegradosome组成成分 | 第16-17页 |
| 1.2.3.2 E.coli中RNAdegradosome结构 | 第17页 |
| 1.2.3.3 E.coli中RNAdegradosome在细胞中的定位 | 第17-18页 |
| 1.2.3.4 E.coli中RNAdegradosome降解mRNA的过程 | 第18页 |
| 1.2.3.5 其他物种中的RNAdegradosome | 第18-20页 |
| 1.3 AnabaenaPCC7120中RNase的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2.材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.2 蛋白质的表达与纯化 | 第24-26页 |
| 2.2.3 三亲本杂交 | 第26页 |
| 2.2.4 Far-Western | 第26-28页 |
| 2.2.5 Western blot--Dot blot | 第28-30页 |
| 2.2.6 细菌双杂交 | 第30页 |
| 2.2.7 非变性凝胶电泳实验 | 第30-31页 |
| 2.2.8 共纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.9 酶活检测 | 第32-35页 |
| 2.2.10 Electrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA) | 第35-37页 |
| 3.结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 生物信息学分析蓝细菌中与E.coli RNA degradosome组成成分同源的蛋白质 | 第37-39页 |
| 3.1.1 蓝细菌中存在与E.coliRNAdegradosome成分同源的蛋白质 | 第37页 |
| 3.1.2 蓝细菌RNaseE的结构及其与E.coliRNaseE的差异 | 第37-39页 |
| 3.2 Anabaena PCC 7120中RNA degradosome的探索 | 第39-43页 |
| 3.2.1 RNase E酶活的测定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 寻找与Anabaena RNase E相互作用的蛋白质 | 第40-43页 |
| 3.2.2.1 体内共纯化RNase E及其互作蛋白质 | 第40-41页 |
| 3.2.2.2 体外鉴定与Anabaena RNaseE相互作用的蛋白质 | 第41-43页 |
| 3.3 Anabaena PCC 7120中RNaseE与PNPase相互作用 | 第43-49页 |
| 3.3.1 证实Anabaena RNaseE与PNPase相互作用 | 第43-45页 |
| 3.3.2 确定Anabaena RNaseE与PNPase互作的区域 | 第45-49页 |
| 3.3.2.1 Dot-blot和Co-purification方法从体内体外证明C4与PNPase结合 | 第45-47页 |
| 3.3.2.2 Far-Western实验寻找能与PNPase结合的最短氨基酸序列 | 第47-48页 |
| 3.3.2.3 短肽RRRRRRSSA能独立结合PNPase,并普遍适用于蓝细菌 | 第48-49页 |
| 3.4 RNase E、RNaseE DC4分别与PNPase一起对RNA降解能力的比较 | 第49-50页 |
| 3.5 AnaRneC2区域为RNA binding Domain,而非C4区域 | 第50-51页 |
| 3.6 RNaseE与PNPase在Anabaena中的表达与互作情况 | 第51-53页 |
| 4.小结与讨论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
