| 缩写词 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 第一章 引言 | 第21-30页 |
| 1 文心兰离体培养的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.1 文心兰离体快繁的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.2 文心兰组培快繁条件的优化研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 文心兰离体培养过程中存在的问题 | 第23-24页 |
| 2 文心兰抗病研究进展 | 第24页 |
| 3 文心兰转基因技术研究进展 | 第24-25页 |
| 4 抗性基因PAD4与EDS1、PR1在抗病中作用中的研究进展 | 第25-28页 |
| 4.1 PAD4基因研究进展 | 第25-26页 |
| 4.2 EDS1基因研究进展 | 第26-27页 |
| 4.3 PR1基因研究进展 | 第27页 |
| 4.4 PAD4与EDS1、PR1基因在抗病过程中的相互作用关系 | 第27-28页 |
| 5 本研究主要意义和内容 | 第28-30页 |
| 5.1 研究意义 | 第28-29页 |
| 5.2 研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 巧克力文心兰原球茎增殖与分化优化培养 | 第30-41页 |
| 第一节 激素和香蕉泥对巧克力文心兰原球茎增殖的影响 | 第30-34页 |
| 1 材料与方法 | 第30-31页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-31页 |
| 1.3 培养条件 | 第31页 |
| 1.4 数据处理 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-33页 |
| 2.1 激素和香蕉泥组合添加对巧克力文心兰原球茎增殖的影响 | 第31页 |
| 2.2 激素和香蕉泥组合添加对巧克力文心兰原球茎增殖的总体状况评价 | 第31-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 3.1 低浓度的激素培养基更适合巧克力文心兰原球茎的增殖 | 第33-34页 |
| 3.2 适量的香蕉泥能够减轻巧克力文心兰原球茎的褐化情况 | 第34页 |
| 第二节 激素和天然添加物交替继代对巧克力文心兰原球茎褐化的影响 | 第34-37页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-35页 |
| 1.3 数据处理 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 第三节 激素和苹果泥对巧克力文心兰原球茎分化的影响 | 第37-41页 |
| 1 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.2 方法 | 第37-38页 |
| 1.3 数据处理 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 3.1 激素与苹果泥合理配比有助于巧克力文心兰原球茎的分化 | 第39页 |
| 3.2 高浓度的细胞分裂素不利于巧克力文心兰原球茎的分化 | 第39-41页 |
| 第三章 巧克力文心兰组培苗壮苗生根与移栽驯化 | 第41-48页 |
| 第一节 激素和天然添加物对巧克力文心兰组培苗壮苗生根的影响 | 第41-44页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| 1.1 材料 | 第41页 |
| 1.2 方法 | 第41-42页 |
| 1.3 培养条件 | 第42页 |
| 1.4 数据处理 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-43页 |
| 2.1 添加苹果泥对巧克力文心兰组培苗壮苗生根的影响 | 第42页 |
| 2.2 添加马铃薯泥对巧克力文心兰组培苗壮苗生根的影响 | 第42页 |
| 2.3 添加香蕉泥对巧克力文心兰组培苗壮苗生根的影响 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 3.1 激素和添加物的合理配比能够促进巧克力文心兰组培苗的生长 | 第43-44页 |
| 3.2 巧克力文心兰组培苗不同生长阶段应选用不同的培养基 | 第44页 |
| 第二节 巧克力文心兰组培苗的驯化移栽 | 第44-48页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-45页 |
| 1.2.1 巧克力文心兰组培苗炼苗 | 第44-45页 |
| 1.2.2 不同移栽方式对巧克力文心兰组培苗移栽的影响 | 第45页 |
| 1.2.3 不同移栽基质对巧克力文心兰组培苗移栽的影响 | 第45页 |
| 1.3 数据处理 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 2.1 两种炼苗方式对巧克力文心兰组培苗移栽的成活率影响 | 第45-46页 |
| 2.2 不同移栽方式对巧克力文心兰组培苗移栽成活率的影响 | 第46页 |
| 2.3 不同的基质配比对巧克力文心兰组培苗后期生长的影响 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 3.1 群植与合理炼苗有助于提高巧克力文心兰组培苗的成活率 | 第47页 |
| 3.2 移栽前定植并采用混合基质更有利于巧克力文心兰的生长 | 第47-48页 |
| 第四章 文心兰抗性基因的克隆与生物信息学分析 | 第48-70页 |
| 第一节 文心兰PAD4基因的克隆与生物信息学分析 | 第48-56页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.2 方法 | 第48-50页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA合成 | 第48页 |
| 1.2.2 文心兰PAD4基因的克隆 | 第48-49页 |
| 1.2.3 PCR扩增体系及程序 | 第49-50页 |
| 1.2.4 目的片段回收、克隆转化与测序 | 第50页 |
| 1.2.5 文心兰PAD4基因的生物信息学分析 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-56页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取与质量检测 | 第50-51页 |
| 2.2 文心兰PAD4基因ORF的验证 | 第51页 |
| 2.3 文心兰PAD4基因3'端与5'端的克隆 | 第51-52页 |
| 2.4 文心兰PAD4蛋白同源性分析 | 第52页 |
| 2.5 文心兰PAD4蛋白理化性质分析 | 第52-53页 |
| 2.6 文心兰PAD4蛋白保守结构域分析 | 第53页 |
| 2.7 文心兰PAD4蛋白的亚细胞定位与信号肽预测 | 第53-54页 |
| 2.8 文心兰PAD4蛋白跨膜结构与磷酸位点预测 | 第54页 |
| 2.9 文心兰PAD4蛋白蜷曲螺旋结构的分析 | 第54-55页 |
| 2.10 文心兰PAD4蛋白二级结构分析与三维结构预测 | 第55页 |
| 2.11 文心兰PAD4系统进化树构建 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56页 |
| 第二节 文心兰EDS1基因的克隆与生物信息学分析 | 第56-63页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 1.1 材料 | 第56-57页 |
| 1.2 方法 | 第57页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA合成 | 第57页 |
| 1.2.2 文心兰EDS1基因的克隆 | 第57页 |
| 1.2.3 PCR扩增体系及程序 | 第57页 |
| 1.2.4 目的片段回收、克隆转化与测序 | 第57页 |
| 1.2.5 文心兰EDS1基因的生物信息学分析 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-63页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取与质量检测 | 第57-58页 |
| 2.2 文心兰EDS1基因ORF的扩增验证 | 第58页 |
| 2.3 文心兰EDS1基因3'端的克隆 | 第58页 |
| 2.4 文心兰EDS1蛋白同源性分析 | 第58-59页 |
| 2.5 文心兰EDS1蛋白理化性质分析 | 第59页 |
| 2.6 文心兰EDS1蛋白保守结构域分析 | 第59-60页 |
| 2.7 文心兰EDS1亚细胞定位与蛋白信号肽的预测 | 第60页 |
| 2.8 文心兰EDS1蛋白跨膜与磷酸位点的预测 | 第60-61页 |
| 2.9 文心兰EDS1蛋白蜷曲螺旋结构的分析 | 第61页 |
| 2.10 文心兰EDS1蛋白二级结构分析与三维结构预测 | 第61-62页 |
| 2.11 文心兰EDS1系统进化树构建 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63页 |
| 第三节 文心兰PR1基因的克隆与生物信息学分析 | 第63-70页 |
| 1 材料与方法 | 第63-64页 |
| 1.1 材料 | 第63页 |
| 1.2 方法 | 第63-64页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA反转录 | 第63页 |
| 1.2.2 文心兰PR1基因保守区的克隆与验证 | 第63-64页 |
| 1.2.3 PCR扩增体系及程序 | 第64页 |
| 1.2.4 目的片段回收、克隆转化与测序 | 第64页 |
| 1.2.5 文心兰PR1基因的生物信息学分析 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-69页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取与质量检测 | 第64页 |
| 2.2 文心兰PR1基因ORF的扩增验证 | 第64-65页 |
| 2.3 文心兰PR1蛋白同源性分析 | 第65页 |
| 2.4 文心兰PR1蛋白理化性质分析 | 第65页 |
| 2.5 文心兰PR1蛋白保守结构域分析 | 第65-66页 |
| 2.6 文心兰PR1蛋白亚细胞定位与信号肽的预测 | 第66页 |
| 2.7 文心兰PR1蛋白磷酸位点的预测 | 第66-67页 |
| 2.8 文心兰PR1蛋白蜷曲螺旋结构的分析 | 第67页 |
| 2.9 文心兰PR1蛋白二级结构分析与三维结构预测 | 第67-68页 |
| 2.10 文心兰PR1系统进化树构建 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 文心兰PAD4、EDS1与PR1基因的表达模式分析 | 第70-81页 |
| 第一节 EDS1、PAD4与PR1基因在文心兰不同组织部位的表达分析 | 第70-73页 |
| 1 材料与方法 | 第70-71页 |
| 1.1 材料 | 第70页 |
| 1.2 试验试剂及仪器 | 第70页 |
| 1.3 方法 | 第70-71页 |
| 1.3.1 文心兰总RNA的提取及cDNA合成 | 第70-71页 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR引物设计与扩增程序 | 第71页 |
| 1.3.3 标准曲线的制定 | 第71页 |
| 1.4 数据分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-73页 |
| 2.1 PAD4在文心兰不同组织部位的分析 | 第71-72页 |
| 2.2 EDS1在文心兰不同组织部位的分析 | 第72页 |
| 2.3 PR1基因在文心兰不同组织部位的分析 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73页 |
| 第二节 病原菌侵染后与抗病相关激素处理下PAD4、EDS1与PR1基因的表达分析 | 第73-81页 |
| 1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 1.1 材料 | 第74页 |
| 1.2 试验试剂及仪器 | 第74页 |
| 1.3 方法 | 第74-75页 |
| 1.3.1 试验材料的处理 | 第74页 |
| 1.3.2 文心兰总RNA的提取及cDNA合成 | 第74页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR引物设计与扩增程序 | 第74页 |
| 1.3.4 标准曲线的制定 | 第74-75页 |
| 1.4 数据分析 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-80页 |
| 2.1 软腐病病菌侵染后PAD4、EDS1与PR1基因的表达分析 | 第75-76页 |
| 2.2 SA处理下PAD4、EDS1与PR1基因的表达分析 | 第76-77页 |
| 2.3 CaCl_2处理下PAD4、EDS1与PR1基因的表达分析 | 第77-78页 |
| 2.4 MeJA处理下PAD4、EDS1与PR1基因的表达分析 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-81页 |
| 3.1 文心兰PAD4、EDS1与PR1基因通过水杨酸信号途径共同在植物抗病过程中起作用 | 第80页 |
| 3.2 文心兰PR1基因对病原菌比较敏感,在文心兰抗病品种的培育中可能发挥重要作用 | 第80页 |
| 3.3 文心兰PAD4与PR1可能参与植物的其他活动 | 第80-81页 |
| 第六章 PR1转化文心兰原球茎的瞬时表达研究 | 第81-88页 |
| 1 材料与方法 | 第81-85页 |
| 1.1 材料 | 第81-82页 |
| 1.1.1 受体材料 | 第81-82页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-85页 |
| 1.2.1 酶切位点分析 | 第82页 |
| 1.2.2 引物设计与合成 | 第82页 |
| 1.2.3 目的片段的扩增 | 第82-83页 |
| 1.2.4 重组载体的构建 | 第83页 |
| 1.2.5 重组质粒的提取 | 第83页 |
| 1.2.6 重组质粒转化农杆菌 | 第83页 |
| 1.2.7 重悬液的制备 | 第83-84页 |
| 1.2.8 文心兰原球茎高渗处理 | 第84页 |
| 1.2.9 农杆菌对文心兰原球茎进行侵染 | 第84页 |
| 1.2.10 洗菌及原球茎转化体的筛选 | 第84页 |
| 1.2.11 过表达PR1后原球茎的分子检测 | 第84页 |
| 1.2.12 转化后文心兰原球茎的qRT-PCR检测 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-87页 |
| 2.1 目的基因PR1酶切位点的分析 | 第85页 |
| 2.2 重组载体的构建与鉴定 | 第85页 |
| 2.3 过表达PR1后原球茎的分子检测 | 第85-86页 |
| 2.4 瞬时表达后原球茎中GUS表达量的变化 | 第86页 |
| 2.5 瞬时表达后原球茎中PR1基因表达量的变化 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-88页 |
| 第七章 小结与展望 | 第88-91页 |
| 1 小结 | 第88-89页 |
| 2 展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录A 图例及图版说明 | 第101-106页 |
| 附录B 本研究使用的基因序列 | 第106-111页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
