| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 绪论 | 第16-58页 |
| 1.1 病毒样颗粒 | 第16-30页 |
| 1.1.1 病毒样颗粒的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.2 病毒样颗粒的表达系统 | 第17-20页 |
| 1.1.3 病毒样颗粒的纯化 | 第20-25页 |
| 1.1.4 病毒样颗粒的表征技术 | 第25-30页 |
| 1.2 病毒样颗粒在疫苗中的应用 | 第30-42页 |
| 1.2.1 病毒样颗粒与免疫应答 | 第30-35页 |
| 1.2.2 病毒样颗粒为基础的预防性疫苗和治疗性疫苗 | 第35-42页 |
| 1.3 病毒样颗粒作为纳米药物载体的应用 | 第42-48页 |
| 1.3.1 病毒样颗粒为载药体系的装载技术 | 第42-45页 |
| 1.3.2 病毒样颗粒载药系统的免疫逃逸策略 | 第45-46页 |
| 1.3.3 病毒样颗粒载药系统的靶向策略 | 第46-47页 |
| 1.3.4 病毒样颗粒载药系统的药物控释 | 第47-48页 |
| 1.4 乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒(HBc-VLP)概述 | 第48-54页 |
| 1.4.1 HBc-VLP的结构特点 | 第48页 |
| 1.4.2 HBc-VLP的免疫特性 | 第48-49页 |
| 1.4.3 HBc-VLP的表达与纯化制备 | 第49-51页 |
| 1.4.4 HBc-VLP在疫苗载体领域的应用 | 第51-53页 |
| 1.4.5 HBc-VLP在纳米载体领域中的应用 | 第53-54页 |
| 1.5 论文立题依据及研究内容 | 第54-58页 |
| 1.5.1 论文立题依据 | 第54-55页 |
| 1.5.2 论文研究内容 | 第55-58页 |
| 2 HBc-VLP发酵表达与理化性质分析 | 第58-78页 |
| 2.1 研究背景 | 第58-59页 |
| 2.2 材料与设备 | 第59-60页 |
| 2.2.1 工程菌 | 第59页 |
| 2.2.2 试剂与设备 | 第59-60页 |
| 2.3 实验方法 | 第60-65页 |
| 2.3.1 工程菌的发酵培养和蛋白的诱导表达 | 第60-61页 |
| 2.3.2 菌体的收集与破碎 | 第61-62页 |
| 2.3.3 超速离心法制备HBc-VLP及衍生物标准品 | 第62页 |
| 2.3.4 理化性质分析 | 第62-65页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第65-76页 |
| 2.4.1 重组菌种的培养与诱导表达检测 | 第65-66页 |
| 2.4.2 HBc-VLP及衍生物定量方法的建立 | 第66-68页 |
| 2.4.3 HBc-VLP的诱导优化 | 第68-69页 |
| 2.4.4 HBc-VLP及衍生物的规模发酵 | 第69-71页 |
| 2.4.5 HBc-VLP及衍生物的理化性质分析 | 第71-76页 |
| 2.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 3 基于HBc-VLP及其衍生物颗粒表面疏水特性的纯化制备 | 第78-102页 |
| 3.1 研究背景 | 第78-79页 |
| 3.2 材料与设备 | 第79页 |
| 3.2.1 工程菌 | 第79页 |
| 3.2.2 试剂与设备 | 第79页 |
| 3.3 实验方法 | 第79-83页 |
| 3.3.1 工程菌的发酵培养 | 第79页 |
| 3.3.2 菌体的收集与破碎 | 第79-80页 |
| 3.3.3 HBc-VLP以及衍生物标准品的制备 | 第80页 |
| 3.3.4 加热预处理初步纯化HBc-VLP | 第80页 |
| 3.3.5 离子交换层析纯化HBc-VLP | 第80页 |
| 3.3.6 HBc-VLP疏水层析填料筛选 | 第80页 |
| 3.3.7 疏水层析纯化HBc-VLP | 第80-81页 |
| 3.3.8 动态结合载量(DBC)的测定 | 第81页 |
| 3.3.9 凝胶过滤层析精制HBc-VLP | 第81页 |
| 3.3.10 HBc-VLP及衍生物表面疏水性质计算 | 第81-82页 |
| 3.3.11 HBc-VLP及其衍生物的疏水性检测 | 第82页 |
| 3.3.12 理化性质检测 | 第82-83页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第83-100页 |
| 3.4.1 HBc-VLP加热预处理和离子交换层析纯化 | 第83-85页 |
| 3.4.2 HBc-VLP表面疏水性分析和疏水层析介质的筛选 | 第85-88页 |
| 3.4.3 凝胶过滤层析(SEC)精制HBc-VLP | 第88-89页 |
| 3.4.4 HBc-VLP纯化工艺的确定和批次重复实验 | 第89-90页 |
| 3.4.5 同源模拟HBc-VLP衍生物的结构及表面性质分析 | 第90-94页 |
| 3.4.6 ANS荧光法预测HIC的最佳盐浓度 | 第94-96页 |
| 3.4.7 动态色谱法确定HIC的最佳盐浓度 | 第96-98页 |
| 3.4.8 HBc-VLP的衍生物的纯化 | 第98-100页 |
| 3.5 本章小结 | 第100-102页 |
| 4 基于HBc-VLP颗粒热膨胀特性的双重加热纯化预处理策略 | 第102-120页 |
| 4.1 研究背景 | 第102-103页 |
| 4.2 材料与设备 | 第103页 |
| 4.2.1 工程菌 | 第103页 |
| 4.2.2 试剂与设备 | 第103页 |
| 4.3 实验方法 | 第103-106页 |
| 4.3.1 工程菌的发酵培养 | 第103-104页 |
| 4.3.2 菌体的收集与破碎 | 第104页 |
| 4.3.3 利用超离技术纯化不同热处理原料中的HBc-VLP | 第104页 |
| 4.3.4 HBc-VLP热稳定性研究 | 第104页 |
| 4.3.5 结构表征 | 第104-105页 |
| 4.3.6 宿主蛋白检测 | 第105页 |
| 4.3.7 两步梯度加热预处理细菌破碎上清液 | 第105页 |
| 4.3.8 疏水层析精制 | 第105-106页 |
| 4.3.9 二次加热制备的HBc-VLP免疫评价 | 第106页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第106-117页 |
| 4.4.1 HBc-VLP热稳定性研究 | 第106-108页 |
| 4.4.2 热处理纯化HBc-VLP研究 | 第108-110页 |
| 4.4.3 HBc-VLP颗粒内部HCP测量 | 第110-112页 |
| 4.4.4 HBc-VLP包载HCP机理分析 | 第112-114页 |
| 4.4.5 二次梯度加热纯化HBc-VLP工艺建立 | 第114-116页 |
| 4.4.6 以二次梯度加热法为核心纯化纯化HBc-VLP为骨架的候选疫苗 | 第116-117页 |
| 4.5 本章小结 | 第117-120页 |
| 5 基于HBc-VLP颗粒纳米孔道热膨胀特性的内、外双抗原流感疫苗设计与制备 | 第120-132页 |
| 5.1 研究背景 | 第120-121页 |
| 5.2 材料与设备 | 第121-123页 |
| 5.2.1 工程菌 | 第121页 |
| 5.2.2 实验动物与毒株 | 第121-122页 |
| 5.2.3 实验试剂与材料 | 第122页 |
| 5.2.4 主要试剂配制 | 第122页 |
| 5.2.5 主要仪器与设备 | 第122-123页 |
| 5.3 实验方法 | 第123-125页 |
| 5.3.1 工程菌的发酵培养 | 第123页 |
| 5.3.2 菌体的收集与破碎 | 第123页 |
| 5.3.3 M2e-HBc的制备 | 第123页 |
| 5.3.4 M2e-HBc加热装载NP制备双抗原流感疫苗 | 第123页 |
| 5.3.5 双抗原流感疫苗的结构表征 | 第123页 |
| 5.3.6 小鼠动物模型免疫与攻毒实验 | 第123-124页 |
| 5.3.7 ELISA检测血清抗体滴度 | 第124-125页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第125-130页 |
| 5.4.1 内、外双抗原流感疫苗的制备 | 第125-126页 |
| 5.4.2 内、外双抗原流感疫苗的结构检测 | 第126-128页 |
| 5.4.3 内、外双抗原流感疫苗免疫抗体水平检测 | 第128-129页 |
| 5.4.4 内、外双抗原流感疫苗抗体分型检测 | 第129页 |
| 5.4.5 内、外双抗原流感疫苗攻毒保护力评价 | 第129-130页 |
| 5.5 本章小结 | 第130-132页 |
| 6 基于HBc-VLP颗粒特性的阿霉素药物装载与控释 | 第132-164页 |
| 6.1 研究背景 | 第132-135页 |
| 6.2 材料与设备 | 第135页 |
| 6.2.1 常规实验材料与药品 | 第135页 |
| 6.2.2 细胞、动物及相关耗材 | 第135页 |
| 6.3 实验方法 | 第135-141页 |
| 6.3.1 HBc-VLP为载体装载DOX制备HBc-DOX (HD) | 第135-136页 |
| 6.3.2 HD颗粒表面通过PEG偶联RGD制备HBc-DOX-PEG-RGD | 第136-138页 |
| 6.3.3 HBc-VLP载药量的确定 | 第138页 |
| 6.3.4 理化性质检测与颗粒表征 | 第138-139页 |
| 6.3.5 体外药物释放检测 | 第139页 |
| 6.3.6 MTT毒性试验考察HDPR的细胞毒性 | 第139-140页 |
| 6.3.7 流式细胞仪检测HDPR的细胞内吞情况 | 第140页 |
| 6.3.8 激光共聚焦检测HDPR的细胞摄取 | 第140-141页 |
| 6.3.9 体内荧光成像与器官分布研究 | 第141页 |
| 6.3.10 体内抑瘤实验 | 第141页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第141-161页 |
| 6.4.1 HBc-VLP热装载DOX初步探究 | 第141-143页 |
| 6.4.2 HBc-VLP装载DOX药量的计算方法的建立 | 第143-144页 |
| 6.4.3 HBc-VLP热装载DOX条件优化 | 第144-147页 |
| 6.4.4 HBc-VLP加热装载DOX与传统解聚-再组装法装载效率的比较 | 第147-148页 |
| 6.4.5 HBc-Dox表面化学修饰RGD靶向肽 | 第148-150页 |
| 6.4.6 HBc-DOX-PEG-RGD (HDPR)的体外稳定性以及智能释放性能 | 第150-153页 |
| 6.4.7 游离和装载于HBc-VLP中的DOX体外细胞毒性 | 第153-154页 |
| 6.4.8 HBc-VLP装载对DOX胞内摄取的影响 | 第154-155页 |
| 6.4.9 游离和装载于HBc-VLP中的DOX胞内定位 | 第155-157页 |
| 6.4.10 药物的肿瘤靶向性以及抑瘤活性评价 | 第157-160页 |
| 6.4.11 HDPR肿瘤靶向性和高抑瘤活性的机理分析与讨论 | 第160-161页 |
| 6.5 本章小结 | 第161-164页 |
| 7 结论与展望 | 第164-170页 |
| 7.1 概要 | 第164页 |
| 7.2 本论文的主要结论 | 第164-165页 |
| 7.3 本论文的创新点 | 第165-167页 |
| 7.4 展望 | 第167-170页 |
| 参考文献 | 第170-198页 |
| 附录A 英文缩写对照表 | 第198-200页 |
| 个人简历及攻读学位期间发表的学术论文与科研成果 | 第200-202页 |
| 作者简历 | 第200页 |
| 获奖情况 | 第200页 |
| 已发表的文章目录 | 第200-201页 |
| 申请专利目录 | 第201-202页 |
| 致谢 | 第202-203页 |
