| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 黄曲霉及其毒素的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 黄曲霉毒素合成代谢研究 | 第13-14页 |
| 1.3 水分活度对黄曲霉生长产毒的影响 | 第14-15页 |
| 1.4 hog通路研究现状 | 第15-17页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 引物 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-31页 |
| 2.2.1 水分活度对黄曲霉生长和产毒的影响 | 第20-21页 |
| 2.2.1.1 不同水分活度对黄曲霉生长的影响 | 第20页 |
| 2.2.1.2 不同水分活度对黄曲霉产毒的影响 | 第20页 |
| 2.2.1.3 不同水分活度对黄曲霉产孢的影响 | 第20-21页 |
| 2.2.1.4 不同水分活度对黄曲霉菌丝形态的影响 | 第21页 |
| 2.2.2 水分活度对黄曲霉转录组的影响研究 | 第21-22页 |
| 2.2.2.1 不同水分活度下cDNA的制备和Illumina测序 | 第21页 |
| 2.2.2.2 过滤低质量Reads和转录组从头组装 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 Unigenes的注释和分析 | 第22页 |
| 2.2.2.4 差异表达基因的识别和分析 | 第22页 |
| 2.2.3 水分活度对黄曲霉蛋白组的影响研究 | 第22-25页 |
| 2.2.3.1 不同水分活度下蛋白样品的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.3.2 iTRAQ标记 | 第23页 |
| 2.2.3.3 肽段分离 | 第23-24页 |
| 2.2.3.4 LC-ESI-MS/MS分析 | 第24页 |
| 2.2.3.5 数据处理 | 第24页 |
| 2.2.3.6 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 afsakA基因的克隆表达 | 第25-27页 |
| 2.2.4.1 黄曲霉菌afsakA基因的生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.4.2 黄曲霉菌RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4.3 RNA的反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.4.4 普通PCR体系 | 第26页 |
| 2.2.4.5 快速双酶切和连接 | 第26-27页 |
| 2.2.4.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| 2.2.4.7 大肠杆菌的转化及转化子验证 | 第27页 |
| 2.2.5 afsakA敲除菌的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 黄曲霉中afsakA基因敲除长片段的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.5.2 黄曲霉菌原生质体的制备 | 第28页 |
| 2.2.5.3 黄曲霉菌原生质体的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5.4 黄曲霉菌丝DNA的粗提 | 第29页 |
| 2.2.6 afsakA敲除菌的相关表型研究 | 第29-31页 |
| 2.2.6.1 afsakA基因的缺失对黄曲霉生长的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 afsakA基因的缺失对黄曲霉产毒的影响 | 第30页 |
| 2.2.6.3 afsakA基因的缺失对黄曲霉产孢的影响 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-60页 |
| 3.1 水分活度对黄曲霉生长和产毒的影响 | 第31-34页 |
| 3.1.1 不同水分活度对黄曲霉生长的影响 | 第31页 |
| 3.1.2 不同水分活度对黄曲霉产毒的影响 | 第31-32页 |
| 3.1.3 不同水分活度对黄曲霉产孢的影响 | 第32-33页 |
| 3.1.4 不同水分活度对黄曲霉菌丝尖端长度的影响 | 第33页 |
| 3.1.5 不同水分活度对黄曲霉菌丝隔膜间隔的影响 | 第33-34页 |
| 3.2 水分活度下黄曲霉转录组的影响分析 | 第34-47页 |
| 3.2.1 Illumina测序和Reads组装 | 第34-35页 |
| 3.2.2 Unigenes的注释和分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 Unigenes的功能分析和分类 | 第36-38页 |
| 3.2.4 DEGs鉴定和分析 | 第38-40页 |
| 3.2.5 与黄曲霉毒素合成相关的DEGs分析 | 第40-42页 |
| 3.2.6 与生长发育相关的DEGs分析 | 第42-47页 |
| 3.3 不同水活度对黄曲霉蛋白组的影响 | 第47-56页 |
| 3.3.1 iTRAQ数据分析 | 第47-49页 |
| 3.3.2 HWPs及LWPs的GO分类 | 第49-51页 |
| 3.3.3 HWPs及LWPs的COG分类及KEGG分类 | 第51-52页 |
| 3.3.4 高渗胁迫相关蛋白 | 第52-53页 |
| 3.3.5 黄曲霉毒素合成相关蛋白 | 第53-56页 |
| 3.4 afsakA基因的鉴定与克隆表达 | 第56-60页 |
| 3.4.1 afsakA的序列分析及进化树构建 | 第56-58页 |
| 3.4.2 afsakA敲除菌的构建 | 第58页 |
| 3.4.3 afsakA敲除菌的相关表型研究 | 第58-60页 |
| 3.4.3.1 afsakA基因的缺失对黄曲霉生长的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.3.2 afsakA基因的缺失对黄曲霉产毒的影响 | 第59页 |
| 3.4.3.3 afsakA基因的缺失对黄曲霉产孢的影响 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 水分活度对黄曲霉生长和产毒的影响 | 第60页 |
| 4.2 水分活度下黄曲霉转录组的影响分析 | 第60-61页 |
| 4.3 水分活度下黄曲霉蛋白组的影响分析 | 第61-62页 |
| 4.4 afsakA基因的功能研究 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录1 | 第75-78页 |
| 1 试剂 | 第75-76页 |
| 2 培养基 | 第76-78页 |
| 附录2 | 第78页 |
| 攻硕期间发表的论文 | 第78页 |
