| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 引言 | 第16-32页 |
| 1.1 斑节对虾性腺发育 | 第16-20页 |
| 1.1.1 雌虾的生殖系统 | 第16-18页 |
| 1.1.2 雄虾的生殖系统 | 第18-20页 |
| 1.2 斑节对虾性腺成熟的调控方法 | 第20-23页 |
| 1.2.1 神经激素调控机制 | 第20-22页 |
| 1.2.1.1 视神经节和眼柄神经分泌激素 | 第20-21页 |
| 1.2.1.2 Y-器官和蜕皮激素 | 第21页 |
| 1.2.1.3 大颚腺和甲基法尼脂 | 第21页 |
| 1.2.1.4 中枢神经系统和性腺刺激激素 | 第21-22页 |
| 1.2.1.5 性腺及自分泌激素 | 第22页 |
| 1.2.2 神经递质调控机制 | 第22-23页 |
| 1.2.3 营养调节机制 | 第23页 |
| 1.3 促性腺激素释放激素概述 | 第23-30页 |
| 1.3.1 促性腺激素释放激素的发现 | 第23-24页 |
| 1.3.2 促性腺激素释放激素的种类及结构 | 第24-27页 |
| 1.3.2.1 促性腺激素释放激素的种类 | 第24-27页 |
| 1.3.2.2 促性腺激素释放激素的结构 | 第27页 |
| 1.3.3 促性腺激素释放激素受体 | 第27-28页 |
| 1.3.4 促性腺激素释放激素的作用机制 | 第28-30页 |
| 1.4 基因串联表达技术的应用情况概述 | 第30-31页 |
| 1.4.1 基因串联技术概述 | 第30页 |
| 1.4.2 串联基因表达策略 | 第30-31页 |
| 1.5 本论文的研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二章 斑节对虾卵巢及神经组织的转录组文库构建 | 第32-49页 |
| 1. 实验材料与方法 | 第32-35页 |
| 1.1 实验材料及试剂 | 第32页 |
| 1.2 实验仪器设备 | 第32-33页 |
| 1.3 各组样品Total RNA的提取及质量检测 | 第33-34页 |
| 1.4 转录组文库的建构及测序分析 | 第34-35页 |
| 1.4.1 构建文库过程 | 第34页 |
| 1.4.2 数据测序分析 | 第34-35页 |
| 2. 实验结果及分析 | 第35-46页 |
| 2.1 转录组测序结果 | 第35-36页 |
| 2.2 转录本拼接结果 | 第36-37页 |
| 2.3 基因功能注释情况 | 第37-41页 |
| 2.4 开放阅读框的获得及预测 | 第41-42页 |
| 2.5 差异表达基因分析 | 第42-44页 |
| 2.5.1 差异基因维恩图 | 第42-43页 |
| 2.5.2 差异基因表达水平聚类分析 | 第43-44页 |
| 2.6 性腺发育相关基因的筛选 | 第44-46页 |
| 3. 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 斑节对虾G蛋白偶联受体基因的鉴定及表达分析 | 第49-65页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 实验用动物 | 第49页 |
| 1.2 不同蜕皮各期和发育期的样品收集 | 第49-50页 |
| 1.3 革兰氏阳/阴性菌刺激后样品收集 | 第50页 |
| 1.4 氨氮胁迫后样品收集 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.1 PmGPCR基因全长的获得 | 第51页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 2.3 各样品的cDNA模板制作 | 第52-53页 |
| 2.3.1 各组样品总RNA提取 | 第52页 |
| 2.3.2 各组样品cDNA的合成 | 第52-53页 |
| 2.4 荧光定量PCR检测PmGPCR基因的相关表达 | 第53-54页 |
| 3 实验结果 | 第54-63页 |
| 3.1 PmGPCR基因的序列分析 | 第54-56页 |
| 3.2 PmGPCR基因多重序列比对及进化树分析 | 第56-59页 |
| 3.3 PmGPCR基因在各组织中的表达情况 | 第59页 |
| 3.4 PmGPCR基因在发育各期过程中的表达情况 | 第59-60页 |
| 3.5 PmGPCR基因在蜕皮各期过程中的表达情况 | 第60-61页 |
| 3.6 PmGPCR基因在受到革兰氏菌刺激后的表达情况 | 第61-62页 |
| 3.7 PmGPCR基因在受到氨氮胁迫后的表达情况 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 斑节对虾性腺组织/细胞的原代培养方法优化 | 第65-80页 |
| 1 实验材料及方法 | 第65-68页 |
| 1.1 实验动物 | 第65页 |
| 1.2 组织培养材料 | 第65-66页 |
| 1.3 实验方法 | 第66-67页 |
| 1.4 实验样品采集与处理 | 第67页 |
| 1.5 数据分析统计 | 第67-68页 |
| 1.6 数据处理 | 第68页 |
| 2 结果及分析 | 第68-76页 |
| 2.1 受试样品发育分期确定 | 第68-69页 |
| 2.2 不同培养基中的细胞形态观察及切片观察 | 第69-72页 |
| 2.2.1 酶解法样品的细胞形态观察 | 第69-70页 |
| 2.2.2 采用机械分离法处理的细胞形态观察 | 第70-72页 |
| 2.3 不同培养条件下中的细胞活力的变化 | 第72-73页 |
| 2.4 不同培养条件下的MAPK信号通路相关基因的表达量变化 | 第73-76页 |
| 3 讨论 | 第76-80页 |
| 3.1 不同培养方法下的细胞生长情况 | 第76-77页 |
| 3.2 不同培养基中的细胞生长情况 | 第77-78页 |
| 3.3 细胞活力的变化情况 | 第78页 |
| 3.4 MAPK信号通路的变化情况 | 第78-80页 |
| 第五章 GnRH类似物对体外培养性腺组织/细胞的作用响 | 第80-90页 |
| 1 实验材料与方法 | 第80-82页 |
| 1.1 材料 | 第80-81页 |
| 1.2 斑节对虾卵巢组织培养 | 第81页 |
| 1.3 组织切片及直径统计 | 第81页 |
| 1.4 相关基因的荧光定量PCR测定 | 第81-82页 |
| 1.5 数据处理 | 第82页 |
| 2 结果 | 第82-88页 |
| 2.1 不同GnRH类似物对卵母/精细胞直径的影响 | 第82-83页 |
| 2.2 不同GnRH类似物孵育下的卵母/精细胞生长情况 | 第83-86页 |
| 2.3 相关基因表达情况 | 第86-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 第六章 GnRH类似物体内注射对斑节对虾性腺成熟的影响 | 第90-124页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第91-92页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第91页 |
| 1.2 实验动物 | 第91页 |
| 1.3 主要试剂及器材 | 第91-92页 |
| 2 实验方法 | 第92-105页 |
| 2.1 多拷贝章鱼GnRH序列的设计与获得 | 第92-93页 |
| 2.2 质粒pGEX-2T的验证 | 第93-95页 |
| 2.3 构建8Oct GnRH基因重组表达质粒 | 第95-98页 |
| 2.3.1 获得8Oct GnRH基因片段 | 第95页 |
| 2.3.2 构建8Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒 | 第95-96页 |
| 2.3.3 验证8Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒的序列 | 第96-97页 |
| 2.3.4 构建8Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒的表达菌株 | 第97-98页 |
| 2.4 16Oct GnRH基因重组表达质粒的构建 | 第98页 |
| 2.5 对8Oct GnRH及16Oct GnRH基因重组表达质粒的融合蛋白诱导表达 | 第98-101页 |
| 2.5.1 融合蛋白的初步诱导表达 | 第98-99页 |
| 2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第99-101页 |
| 2.5.3 蛋白免疫印迹实验（Western Blotting） | 第101页 |
| 2.5.4 融合蛋白的大量诱导表达 | 第101页 |
| 2.6 多拷贝章鱼GnRH类似物融合蛋白的纯化 | 第101-102页 |
| 2.7 测定8拷贝及16拷贝的章鱼GnRH类似物纯化的融合蛋白浓度 | 第102-103页 |
| 2.8 注射实验设计 | 第103-104页 |
| 2.9 相关基因的表达情况分析 | 第104-105页 |
| 2.9.1 各组样品总RNA提取 | 第104页 |
| 2.9.2 各组样品cDNA的合成 | 第104页 |
| 2.9.3 各基因引物的设计 | 第104-105页 |
| 2.9.4 定量数据分析 | 第105页 |
| 3 实验结果 | 第105-121页 |
| 3.1 8Oct GnRH-p UC57重组质粒酶切验证 | 第105-106页 |
| 3.2 8Oct GnRH-p GEX-2T、16Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒的酶切验证 | 第106-107页 |
| 3.2.1 8Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒的酶切验证及质粒图谱 | 第106页 |
| 3.2.2 16Oct GnRH-p GEX-2T重组质粒的酶切验证及质粒图谱 | 第106-107页 |
| 3.3 8Oct GnRH-p GEX-2T、16Oct GnRH-p GEX-2T诱导表达及蛋白纯化情况 | 第107-109页 |
| 3.4 测定8拷贝及16拷贝的GnRH类似物纯化的融合蛋白浓度 | 第109-110页 |
| 3.5 性腺指数分析 | 第110-111页 |
| 3.6 血淋巴中的性类固醇激素指数分析 | 第111-114页 |
| 3.7 斑节对虾性腺发育相关基因表达情况的分析 | 第114-121页 |
| 3.7.1 Vg基因的表达情况 | 第114-115页 |
| 3.7.2 GnRHR基因的表达情况 | 第115-117页 |
| 3.7.3 CREB基因的表达情况 | 第117-119页 |
| 3.7.4 c-JUN基因的表达情况 | 第119-121页 |
| 4 讨论 | 第121-124页 |
| 总结 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-132页 |
| 附录一 实验主要试剂及配置 | 第132-135页 |
| 附录二 实验仪器设备及产地 | 第135-136页 |
| 附录三 攻读硕士学位期间发表论文及参加的会议 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
