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拟南芥糖基转移酶基因UGT73C4参与抗病的作用分析

中文摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
符号说明第10-11页
一 前言第11-22页
    1 植物糖基转移酶与糖基化修饰第11-16页
        1.1 糖基转移酶的定义、分类和特点第11-12页
        1.2 糖基转移酶的生物学功能第12-16页
        1.3 糖基转移酶的未来应用第16页
    2 植物的免疫反应第16-20页
        2.1 植物免疫的分类与特点第16-17页
        2.2 微生物识别模式触发的免疫反应第17-19页
        2.3 效应蛋白触发的免疫反应第19-20页
        2.4 植物免疫与SA的关系第20页
    3 本研究的目的和意义第20-22页
        3.1 植物抗病研究的理论意义和实际意义第20页
        3.2 本课题的立题依据和研究内容第20-22页
二 材料与方法第22-39页
    1 实验材料第22-25页
        1.1 植物材料第22页
        1.2 载体与菌株第22页
        1.3 主要试剂和药品第22页
        1.4 主要培养基第22-23页
        1.5 主要溶液配方第23-25页
    2 实验方法第25-39页
        2.1 植物材料种植第25页
        2.2 植物过表达载体构建及转基因植株的获得第25-30页
        2.3 CRISPR/Cas9基因敲除载体构建及转基因植株的获得第30-32页
        2.4 T-DNA插入体的鉴定和获得第32-33页
        2.5 原核表达载体的构建及蛋白纯化和体外酶促反应第33-34页
        2.6 植物GUS报告载体的构建及转基因植株的获得第34-35页
        2.7 病原细菌Pst DC3000诱导分析第35页
        2.8 转基因植物抗病表型分析第35-36页
        2.9 转基因植物抗病相关生理指标分析测定第36-38页
        2.10 Foc699-GFP感染实验第38页
        2.11 实验数据的统计学处理第38-39页
三 结果与分析第39-67页
    1 拟南芥UGT73C4基因表达特异性研究第39-44页
        1.1 病原细菌侵染和SA处理对UGT73C4基因的诱导表达分析第39-40页
        1.2 UGT73C4启动子驱动GUS表达的转基因植株的获得与表达分析第40-44页
    2 UGT73C4过表达体和突变体植株的获得与鉴定第44-49页
        2.1 UGT73C4过表达植株的制备第44页
        2.2 UGT73C4过表达株系中基因表达水平的鉴定第44-45页
        2.3 UGT73C4 CRISPR/Cas9载体的构建和突变体株系的获得第45-48页
        2.4 UGT73C4的T-DNA插入突变体的鉴定与获得第48-49页
    3 UGT73C4基因在植物抵御病原菌侵害中的作用第49-58页
        3.1 UGT73C4突变体和过表达体的抗病性第49页
        3.2 UGT73C4突变体和过表达体中抗病相关的生理指标第49-51页
        3.3 UGT73C4对烟草叶片的瞬时转化实验第51-53页
        3.4 UGT73C4突变体和过表达体中抗病相关基因表达的差异第53-55页
        3.5 UGT73C4突变体和过表达体中SA含量的比较第55-57页
        3.6 病原菌对UGT73C4的诱导表达部分依赖于SA第57-58页
    4 UGT73C4基因在植物根部表达并参与真菌的抗病作用第58-63页
        4.1 UGT73C4基因在植物根部受真菌Foc699-GFP诱导表达第58页
        4.2 真菌Foc699-GFP诱导后UGT73C4启动子:GUS表达分析第58-59页
        4.3 UGT73C4突变体和过表达体根中Foc699-GFP荧光含量检测第59-60页
        4.4 UGT73C4突变体和过表达体根中Foc699-GFP荧光观察第60页
        4.5 Foc699-GFP处理后UGT73C4突变体和过表达体生长表型比较第60-61页
        4.6 UGT73C4突变体和过表达体中抗真菌相关基因表达的差异第61-62页
        4.7 UGT73C4基因在根部受Me-JA诱导表达第62-63页
        4.8 土壤真菌侵染后不同株系根部的活性氧积累第63页
    5 原核表达载体的构建及酶蛋白纯化和体外酶促反应第63-67页
        5.1 原核表达载体的构建第64页
        5.2 UGT73C4在原核细胞中的表达与纯化第64页
        5.3 体外酶促反应与底物筛选第64-67页
四 讨论第67-70页
    1 糖基转移酶UGT73C4在植物抗病反应中具有重要作用第67页
    2 糖基转移酶UGT73C4底物的推测及可能的抗病机制第67-68页
    3 糖基转移酶UGT73亚家族在植物抗病性适应进化中的功能第68-70页
五 论文创新点与不足之处第70-71页
    总结与创新点第70页
    不足之处及需要进一步解决的问题第70-71页
六 其它基因的研究总结第71页
七 在校期间发表文章和奖励第71-72页
附表:本论文用到的引物序列第72-74页
参考文献第74-83页
致谢第83-84页
学位论文评阅及答辩情况表第84页

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