中文摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
符号说明 | 第10-11页 |
一 前言 | 第11-22页 |
1 植物糖基转移酶与糖基化修饰 | 第11-16页 |
1.1 糖基转移酶的定义、分类和特点 | 第11-12页 |
1.2 糖基转移酶的生物学功能 | 第12-16页 |
1.3 糖基转移酶的未来应用 | 第16页 |
2 植物的免疫反应 | 第16-20页 |
2.1 植物免疫的分类与特点 | 第16-17页 |
2.2 微生物识别模式触发的免疫反应 | 第17-19页 |
2.3 效应蛋白触发的免疫反应 | 第19-20页 |
2.4 植物免疫与SA的关系 | 第20页 |
3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
3.1 植物抗病研究的理论意义和实际意义 | 第20页 |
3.2 本课题的立题依据和研究内容 | 第20-22页 |
二 材料与方法 | 第22-39页 |
1 实验材料 | 第22-25页 |
1.1 植物材料 | 第22页 |
1.2 载体与菌株 | 第22页 |
1.3 主要试剂和药品 | 第22页 |
1.4 主要培养基 | 第22-23页 |
1.5 主要溶液配方 | 第23-25页 |
2 实验方法 | 第25-39页 |
2.1 植物材料种植 | 第25页 |
2.2 植物过表达载体构建及转基因植株的获得 | 第25-30页 |
2.3 CRISPR/Cas9基因敲除载体构建及转基因植株的获得 | 第30-32页 |
2.4 T-DNA插入体的鉴定和获得 | 第32-33页 |
2.5 原核表达载体的构建及蛋白纯化和体外酶促反应 | 第33-34页 |
2.6 植物GUS报告载体的构建及转基因植株的获得 | 第34-35页 |
2.7 病原细菌Pst DC3000诱导分析 | 第35页 |
2.8 转基因植物抗病表型分析 | 第35-36页 |
2.9 转基因植物抗病相关生理指标分析测定 | 第36-38页 |
2.10 Foc699-GFP感染实验 | 第38页 |
2.11 实验数据的统计学处理 | 第38-39页 |
三 结果与分析 | 第39-67页 |
1 拟南芥UGT73C4基因表达特异性研究 | 第39-44页 |
1.1 病原细菌侵染和SA处理对UGT73C4基因的诱导表达分析 | 第39-40页 |
1.2 UGT73C4启动子驱动GUS表达的转基因植株的获得与表达分析 | 第40-44页 |
2 UGT73C4过表达体和突变体植株的获得与鉴定 | 第44-49页 |
2.1 UGT73C4过表达植株的制备 | 第44页 |
2.2 UGT73C4过表达株系中基因表达水平的鉴定 | 第44-45页 |
2.3 UGT73C4 CRISPR/Cas9载体的构建和突变体株系的获得 | 第45-48页 |
2.4 UGT73C4的T-DNA插入突变体的鉴定与获得 | 第48-49页 |
3 UGT73C4基因在植物抵御病原菌侵害中的作用 | 第49-58页 |
3.1 UGT73C4突变体和过表达体的抗病性 | 第49页 |
3.2 UGT73C4突变体和过表达体中抗病相关的生理指标 | 第49-51页 |
3.3 UGT73C4对烟草叶片的瞬时转化实验 | 第51-53页 |
3.4 UGT73C4突变体和过表达体中抗病相关基因表达的差异 | 第53-55页 |
3.5 UGT73C4突变体和过表达体中SA含量的比较 | 第55-57页 |
3.6 病原菌对UGT73C4的诱导表达部分依赖于SA | 第57-58页 |
4 UGT73C4基因在植物根部表达并参与真菌的抗病作用 | 第58-63页 |
4.1 UGT73C4基因在植物根部受真菌Foc699-GFP诱导表达 | 第58页 |
4.2 真菌Foc699-GFP诱导后UGT73C4启动子:GUS表达分析 | 第58-59页 |
4.3 UGT73C4突变体和过表达体根中Foc699-GFP荧光含量检测 | 第59-60页 |
4.4 UGT73C4突变体和过表达体根中Foc699-GFP荧光观察 | 第60页 |
4.5 Foc699-GFP处理后UGT73C4突变体和过表达体生长表型比较 | 第60-61页 |
4.6 UGT73C4突变体和过表达体中抗真菌相关基因表达的差异 | 第61-62页 |
4.7 UGT73C4基因在根部受Me-JA诱导表达 | 第62-63页 |
4.8 土壤真菌侵染后不同株系根部的活性氧积累 | 第63页 |
5 原核表达载体的构建及酶蛋白纯化和体外酶促反应 | 第63-67页 |
5.1 原核表达载体的构建 | 第64页 |
5.2 UGT73C4在原核细胞中的表达与纯化 | 第64页 |
5.3 体外酶促反应与底物筛选 | 第64-67页 |
四 讨论 | 第67-70页 |
1 糖基转移酶UGT73C4在植物抗病反应中具有重要作用 | 第67页 |
2 糖基转移酶UGT73C4底物的推测及可能的抗病机制 | 第67-68页 |
3 糖基转移酶UGT73亚家族在植物抗病性适应进化中的功能 | 第68-70页 |
五 论文创新点与不足之处 | 第70-71页 |
总结与创新点 | 第70页 |
不足之处及需要进一步解决的问题 | 第70-71页 |
六 其它基因的研究总结 | 第71页 |
七 在校期间发表文章和奖励 | 第71-72页 |
附表:本论文用到的引物序列 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-83页 |
致谢 | 第83-84页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第84页 |