| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 主要符号对照表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 石油污染概述 | 第11-12页 |
| 1.2 石油污染的现状 | 第12-15页 |
| 1.2.1 石油污染土壤的现状 | 第12-13页 |
| 1.2.2 石油污染海洋的现状 | 第13-15页 |
| 1.3 石油污染的危害 | 第15-17页 |
| 1.3.1 石油污染对自然环境的危害 | 第15页 |
| 1.3.2 石油污染对人体的危害 | 第15-16页 |
| 1.3.3 石油污染的相关法律 | 第16-17页 |
| 1.4 石油污染的修复 | 第17-18页 |
| 1.4.1 石油污染的常规修复 | 第17-18页 |
| 1.4.2 石油污染的微生物修复 | 第18页 |
| 1.5 烷烃羟化酶的研究 | 第18-21页 |
| 1.5.1 烷烃羟化酶的分类 | 第18-19页 |
| 1.5.2 alkB基因的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.6 本文的研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 重组质粒的构建 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 实验质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23页 |
| 2.1.5 常用溶液 | 第23页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 提取基因组DNA | 第23-25页 |
| 2.2.2 质粒pET28a(+)的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第25-27页 |
| 2.2.4 双酶切反应 | 第27页 |
| 2.2.5 构建重组菌 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.3.1 pET28a(+)-alkB的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.2 总基因组的检测与目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.3 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.4 大肠杆菌BL21的转化结果 | 第32页 |
| 2.3.5 解烃菌TY22序列结果分析 | 第32-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 烷烃羟化酶基因的表达和纯化 | 第35-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 常用溶液 | 第35-36页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 诱导重组菌表达 | 第36-37页 |
| 3.2.2 ChelatingSepharose胶的镍鳌合处理方法 | 第37页 |
| 3.2.3 重组蛋白在E.coliBL21中的大量表达 | 第37-38页 |
| 3.2.4 重组蛋白的纯化 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.3.1 重组菌alkB基因的表达 | 第38-40页 |
| 3.3.2 镍亲和层析纯化的原理 | 第40-41页 |
| 3.3.3 目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 重组蛋白酶活和最适反应条件的测定 | 第43-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 常用溶液 | 第43页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 牛血清蛋白浓度标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| 4.2.2 纯化蛋白浓度的测定 | 第44页 |
| 4.2.3 NADH与重组蛋白酶活关系的探究 | 第44-45页 |
| 4.2.4 蛋白粗提液酶活的测定 | 第45页 |
| 4.2.5 重组蛋白酶活的最适条件的测定 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.3.1 考马斯亮蓝法原理 | 第46页 |
| 4.3.2 标准蛋白曲线的数据分析 | 第46-47页 |
| 4.3.3 NADH与重组蛋白酶活关系的分析 | 第47-48页 |
| 4.3.4 蛋白粗提液酶活的测定结果 | 第48-49页 |
| 4.3.5 重组蛋白酶活性的最适条件的测定 | 第49-50页 |
| 4.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 alkB基因的功能互补鉴定 | 第51-59页 |
| 5.1 实验材料 | 第51页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第51页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 常用溶液 | 第51页 |
| 5.1.4 常用设备 | 第51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 5.2.1 聚合酶链式反应 | 第51-52页 |
| 5.2.2 双酶切反应 | 第52页 |
| 5.2.3 构建重组菌 | 第52-53页 |
| 5.2.4 两种重组菌的互补功能实验 | 第53-54页 |
| 5.3 结果分析 | 第54-58页 |
| 5.3.1 重组质粒pCom8-alkB的构建 | 第54-55页 |
| 5.3.2 重组菌的鉴定 | 第55-56页 |
| 5.3.3 两种重组菌的互补实验结果分析 | 第56-58页 |
| 5.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 6.1 结论 | 第59页 |
| 6.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-70页 |
| 在学期间的科研情况 | 第70页 |