摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
缩略词表 | 第7-12页 |
第一章 绪论 | 第12-32页 |
1.1 糖尿病 | 第12-20页 |
1.1.1 糖尿病概述 | 第12-13页 |
1.1.2 Ⅱ型糖尿病的治疗策略及药物 | 第13-15页 |
1.1.3 胰高血糖素样肽-1(GLP-1) | 第15-18页 |
1.1.4 GLP-1的相关药物研究现状 | 第18-20页 |
1.2 乳酸菌对Ⅱ型糖尿病的影响 | 第20-24页 |
1.2.1 乳酸菌简介 | 第20-21页 |
1.2.2 肠道菌群改变与糖尿病发生的关系 | 第21页 |
1.2.3 乳酸菌对糖尿病的作用 | 第21-23页 |
1.2.4 乳酸菌调控糖尿病的可能机制 | 第23-24页 |
1.3 乳酸菌作为功能因子投递载体的研究概况 | 第24-29页 |
1.3.1 乳酸菌作为功能因子投递载体的优势 | 第24-25页 |
1.3.2 乳酸菌的表达系统 | 第25-27页 |
1.3.3 乳酸菌作为粘膜投递载体的研究进展 | 第27-29页 |
1.4 立题依据及意义 | 第29-30页 |
1.5 研究内容及技术路线 | 第30-32页 |
1.5.1 研究内容 | 第30-31页 |
1.5.2 技术路线 | 第31-32页 |
第二章 重组的乳酸乳球菌分泌表达Exendin-4 | 第32-49页 |
2.1 引言 | 第32页 |
2.2 材料与试剂 | 第32-35页 |
2.2.1 使用菌株及质粒 | 第32-33页 |
2.2.2 菌株培养方法 | 第33页 |
2.2.3 主要试剂及溶液配制 | 第33-35页 |
2.2.4 主要仪器设备 | 第35页 |
2.3 实验方法 | 第35-39页 |
2.3.1 L.lactococcus NZ9000感受态制备及转化 | 第35-36页 |
2.3.2 Exendin-4基因的克隆及表达 | 第36-37页 |
2.3.3 Western blot检测重组蛋白表达 | 第37-38页 |
2.3.4 大鼠胰岛细胞系INS-1的培养 | 第38页 |
2.3.5 促胰岛素分泌实验 | 第38页 |
2.3.6 促胰岛细胞增殖实验 | 第38-39页 |
2.3.7 促胰岛细胞凋亡实验 | 第39页 |
2.3.8 AKT和p-AKT蛋白表达的检测 | 第39页 |
2.3.9 实验数据分析 | 第39页 |
2.4 结果分析 | 第39-47页 |
2.4.1 Exendin-4表达载体的构建及转化 | 第39-41页 |
2.4.2 Western blot检测胞内外蛋白表达 | 第41页 |
2.4.3 ELISA检测nisin诱导不同时间胞外蛋白的分泌量 | 第41-42页 |
2.4.4 Nisin诱导重组菌株1h后重组菌株持续表达分泌Exendin-4的能力 | 第42-43页 |
2.4.5 rExd4促进胰岛细胞系INS-1分泌胰岛素 | 第43-44页 |
2.4.6 rExd4促进胰岛细胞增殖 | 第44-45页 |
2.4.7 rExd4抑制胰岛细胞凋亡 | 第45-46页 |
2.4.8 rExd4上调胰岛细胞AKT和p-AKT蛋白的表达 | 第46-47页 |
2.5 讨论 | 第47-48页 |
2.6 小结 | 第48-49页 |
第三章 具有降血糖益生作用的乳杆菌的筛选 | 第49-64页 |
3.1 引言 | 第49-50页 |
3.2 材料与试剂 | 第50-51页 |
3.2.1 菌株 | 第50页 |
3.2.2 菌株培养方法 | 第50页 |
3.2.3 主要试剂及溶液配置 | 第50-51页 |
3.2.4 主要仪器设备 | 第51页 |
3.3 实验方法 | 第51-55页 |
3.3.1 乳酸菌上清(CFS)的制备 | 第51页 |
3.3.2 乳酸菌胞内提取物(CFE)的制备 | 第51-52页 |
3.3.3 DPP-Ⅳ抑制活性的分析 | 第52-53页 |
3.3.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的分析 | 第53-54页 |
3.3.5 乳酸菌在人工模拟的胃肠液中的存活率 | 第54页 |
3.3.6 乳酸菌对HT-29细胞的黏附性分析 | 第54页 |
3.3.7 实验数据分析 | 第54-55页 |
3.4 结果与分析 | 第55-63页 |
3.4.1 乳酸菌对DPP-Ⅳ的抑制率 | 第55-58页 |
3.4.2 乳酸菌在不同生长阶段分泌的CFS的DPP-Ⅳ抑制率 | 第58页 |
3.4.3 温度、酸碱处理及酶处理对乳酸菌上清DPP-Ⅳ抑制活性的影响 | 第58-60页 |
3.4.4 乳酸菌对猪小肠提取的α-葡萄糖苷酶的抑制率 | 第60-62页 |
3.4.5 乳酸菌对人工模拟的胃肠液的耐受能力及对肠上皮细胞HT-29的黏附能力 | 第62-63页 |
3.5 本章小结 | 第63-64页 |
第四章 L. paracasei L14分泌表达具有生物活性的Exendin-4 | 第64-82页 |
4.1 引言 | 第64页 |
4.2 材料与试剂 | 第64-67页 |
4.2.1 实验菌株及质粒 | 第64-65页 |
4.2.2 菌株培养方法 | 第65页 |
4.2.3 主要试剂及溶液配制 | 第65-66页 |
4.2.4 主要仪器设备 | 第66-67页 |
4.3 实验方法 | 第67-70页 |
4.3.1 副干酪乳杆菌L.paracasei L14感受态制备及转化 | 第67-68页 |
4.3.2 Exendin-4基因的克隆及电激转化入L.paracasei L14 | 第68页 |
4.3.3 Exendin-4基因在L.paracasei L14/pMG76e-Exendin-4中的异源表达和分泌 | 第68页 |
4.3.4 大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1的培养方法 | 第68页 |
4.3.5 促胰岛素分泌实验及胰岛细胞RNA提取 | 第68-69页 |
4.3.6 促胰岛细胞增殖实验 | 第69-70页 |
4.3.7 促胰岛细胞凋亡实验 | 第70页 |
4.3.8 Caco-2细胞对重组菌株分泌的Exendin-4的转运吸收实验 | 第70页 |
4.3.9 试验数据分析 | 第70页 |
4.4 结果与分析 | 第70-80页 |
4.4.1 PCR扩增Exendin-4基因 | 第70-71页 |
4.4.2 Exendin-4表达载体的构建及电激转化 | 第71-72页 |
4.4.3 Western blot检测Exendin-4在L.paracasei L14中的重组表达 | 第72-73页 |
4.4.4 重组的Exendin-4促进胰岛细胞分泌胰岛素 | 第73-74页 |
4.4.5 重组的Exendin-4上调PDX-1和Insulin基因的mRNA表达 | 第74-75页 |
4.4.6 重组的Exendin-4促进胰岛细胞增殖和抑制胰岛细胞凋亡 | 第75-78页 |
4.4.7 Caco-2细胞对重组菌株分泌的Exendin-4的转运吸收实验 | 第78-80页 |
4.5 讨论 | 第80-81页 |
4.6 小结 | 第81-82页 |
第五章 乳杆菌工程菌株投递Exendin-4的体内生物活性研究 | 第82-105页 |
5.1 引言 | 第82页 |
5.2 材料与试剂 | 第82-85页 |
5.2.1 试验菌株 | 第82-83页 |
5.2.2 试验动物与饲料 | 第83-84页 |
5.2.3 主要试剂 | 第84页 |
5.2.4 主要仪器设备 | 第84-85页 |
5.3 实验方法 | 第85-88页 |
5.3.1 乳酸菌的制备 | 第85页 |
5.3.2 动物饲养条件 | 第85页 |
5.3.3 动物分组及糖尿病模型建立 | 第85-86页 |
5.3.4 摄食量、饮水量和体重 | 第86-87页 |
5.3.5 血糖检测 | 第87页 |
5.3.6 口服糖耐量实验(OGTT) | 第87页 |
5.3.7 大鼠的处死及样品的收集 | 第87页 |
5.3.8 脏器系数 | 第87页 |
5.3.9 糖尿病相关指标检测 | 第87页 |
5.3.10 炎症因子检测 | 第87-88页 |
5.3.11 肝匀浆液中抗氧化指标的检测 | 第88页 |
5.3.12 血清中血脂四项及游离脂肪酸的检测 | 第88页 |
5.3.13 胰腺和肝脏组织HE染色切片的制作 | 第88页 |
5.3.14 结肠组织免疫荧光检测 | 第88页 |
5.3.15 统计方法 | 第88页 |
5.4 结果与分析 | 第88-103页 |
5.4.1 大鼠肠道中Exendin-4的检测 | 第88-90页 |
5.4.2 Ⅱ型糖尿病大鼠模型的建立 | 第90-96页 |
5.4.3 乳酸菌对Ⅱ型糖尿病大鼠生化指标的影响 | 第96-100页 |
5.4.4 乳酸菌对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏和胰腺组织的影响 | 第100-103页 |
5.5 讨论 | 第103-104页 |
5.6 本章小结 | 第104-105页 |
第六章 全文结论与展望 | 第105-107页 |
6.1 全文总结 | 第105-106页 |
6.2 论文创新点 | 第106页 |
6.3 展望 | 第106-107页 |
参考文献 | 第107-123页 |
附录 | 第123-124页 |
致谢 | 第124-126页 |
个人简介 | 第126-127页 |
发表论文情况 | 第126-127页 |
获奖情况 | 第127页 |