摘要 | 第6-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
前言 | 第16-17页 |
文献综述 | 第17-37页 |
第一章 胎盘滋养层细胞的研究进展 | 第17-29页 |
1.1 滋养层细胞的功能 | 第17-23页 |
1.1.1 滋养层细胞与妊娠识别 | 第17-20页 |
1.1.2 滋养层细胞与胚胎附植 | 第20-21页 |
1.1.3 滋养层细胞与胎盘形成 | 第21-23页 |
1.2 胎盘滋养层细胞的体外培养 | 第23-25页 |
1.2.1 胎盘滋养层细胞的分离 | 第23-24页 |
1.2.2 胎盘滋养层细胞的纯化 | 第24-25页 |
1.3 胎盘滋养层细胞的鉴定 | 第25页 |
1.4 胎盘滋养层细胞的永生化 | 第25-29页 |
1.4.1 端粒(Telomere)和端粒酶(Telomerase)的发现 | 第26页 |
1.4.2 端粒和端粒酶的结构与功能 | 第26-27页 |
1.4.3 端粒酶与细胞衰老、永生化 | 第27-29页 |
第二章 胎盘滋养层细胞与细胞凋亡研究进展 | 第29-37页 |
2.1 细胞凋亡的生物学特征 | 第29页 |
2.2 细胞凋亡调控的分子基础 | 第29-30页 |
2.2.1 Caspase 家族 | 第29-30页 |
2.2.2 Bax/Bcl-2 蛋白家族 | 第30页 |
2.3 细胞凋亡信号转导通路 | 第30-31页 |
2.3.1 死亡受体通路 | 第30-31页 |
2.3.2 线粒体通路 | 第31页 |
2.4 胎盘滋养层细胞与细胞凋亡 | 第31-35页 |
2.4.1 内源性调控因素 | 第32-33页 |
2.4.2 外源性调控因素 | 第33-34页 |
2.4.3 单核细胞/巨噬细胞 | 第34-35页 |
2.5 苦马豆素与细胞凋亡 | 第35页 |
2.5.1 苦马豆素和家畜中毒 | 第35页 |
2.5.2 苦马豆素的诱导细胞凋亡作用 | 第35页 |
2.6 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
试验研究 | 第37-84页 |
第三章 永生化山羊胎盘滋养层细胞系的建立及生物学特性分析 | 第37-59页 |
3.1 材料 | 第38-41页 |
3.1.1 菌种和细胞 | 第38页 |
3.1.2 组织和试验动物 | 第38页 |
3.1.3 主要试剂 | 第38页 |
3.1.4 试验所用溶液及其配制 | 第38-41页 |
3.1.5 主要仪器 | 第41页 |
3.2 方法 | 第41-47页 |
3.2.1 山羊胎盘滋养层细胞的分离培养 | 第41-42页 |
3.2.2 山羊胎盘滋养层细胞的鉴定 | 第42页 |
3.2.3 hTERT 基因转染原代山羊胎盘滋养层细胞 | 第42-43页 |
3.2.4 转染后山羊胎盘滋养层细胞的鉴定 | 第43页 |
3.2.5 外源性 hTERT 基因在转染后山羊胎盘滋养层细胞中的表达 | 第43-46页 |
3.2.6 山羊胎盘滋养层细胞生物学特性的分析 | 第46-47页 |
3.2.7 统计学分析 | 第47页 |
3.3 结果 | 第47-56页 |
3.3.1 原代山羊胎盘滋养层细胞的分离 | 第47-48页 |
3.3.2 pCI-neo-hTERT 质粒的鉴定 | 第48-49页 |
3.3.3 G418 对山羊胎盘滋养层细胞最佳筛选浓度的确定 | 第49页 |
3.3.4 转染后阳性细胞的扩大培养 | 第49页 |
3.3.5 山羊胎盘滋养层细胞的形态特征 | 第49-50页 |
3.3.6 山羊胎盘滋养层细胞的鉴定 | 第50-51页 |
3.3.7 hTERT 基因在山羊胎盘滋养层细胞中的表达 | 第51-52页 |
3.3.8 山羊胎盘滋养层细胞的生长特性 | 第52-53页 |
3.3.9 山羊胎盘滋养层细胞激素分泌功能的检测 | 第53-54页 |
3.3.10 体外培养的山羊胎盘滋养层细胞具有侵袭性 | 第54页 |
3.3.11 软琼脂克隆形成试验 | 第54-55页 |
3.3.12 裸鼠致瘤性试验 | 第55-56页 |
3.4 讨论 | 第56-57页 |
3.5 小结 | 第57-59页 |
第四章 苦马豆素对山羊胎盘滋养层细胞迁移和侵袭功能的影响 | 第59-71页 |
4.1 材料 | 第60-61页 |
4.1.1 SW 与细胞 | 第60页 |
4.1.2 主要试剂 | 第60页 |
4.1.3 试验所用溶液及其配制 | 第60-61页 |
4.1.4 主要仪器 | 第61页 |
4.2 方法 | 第61-64页 |
4.2.1 SW 对山羊胎盘滋养层细胞活性的影响 | 第61-62页 |
4.2.2 SW 对山羊胎盘滋养层细胞细胞周期的影响 | 第62页 |
4.2.3 SW 对山羊胎盘滋养层细胞黏附能力的影响 | 第62-63页 |
4.2.4 细胞迁移试验 | 第63页 |
4.2.5 细胞侵袭试验 | 第63页 |
4.2.6 Western blot 检测 | 第63页 |
4.2.7 统计学分析 | 第63-64页 |
4.3 结果 | 第64-69页 |
4.3.1 SW 对山羊胎盘滋养层细胞活性的影响 | 第64页 |
4.3.2 SW 对山羊胎盘滋养层细胞细胞周期的影响 | 第64-65页 |
4.3.3 SW 对山羊胎盘滋养层细胞周期蛋白的影响 | 第65页 |
4.3.4 SW 对山羊胎盘滋养层细胞黏附能力的影响 | 第65-66页 |
4.3.5 SW 对山羊胎盘滋养层细胞迁移能力的影响 | 第66-67页 |
4.3.6 SW 对山羊胎盘滋养层细胞侵袭能力的影响 | 第67-68页 |
4.3.7 SW 对山羊胎盘滋养层细胞 MT1-MMP、MMP-2 和 TIMP-2 的影响 | 第68-69页 |
4.4 讨论 | 第69-70页 |
4.5 小结 | 第70-71页 |
第五章 苦马豆素诱导山羊胎盘滋养层细胞凋亡的信号转导通路 | 第71-84页 |
5.1 材料 | 第72-74页 |
5.1.1 SW 与细胞 | 第72页 |
5.1.2 主要试剂 | 第72页 |
5.1.3 试验所用溶液及其配制 | 第72-73页 |
5.1.4 主要仪器 | 第73-74页 |
5.2 方法 | 第74-76页 |
5.2.1 SW 对山羊胎盘滋养层细胞活性的影响 | 第74页 |
5.2.2 SW 对山羊胎盘滋养层细胞形态的影响 | 第74页 |
5.2.3 DNA 片段化分析 | 第74-75页 |
5.2.4 流式细胞术检测 SW 对山羊胎盘滋养层细胞凋亡率的影响 | 第75页 |
5.2.5 蛋白浓度检测 | 第75页 |
5.2.6 Caspase 活性检测 | 第75页 |
5.2.7 Western blot 检测 | 第75-76页 |
5.2.8 TUNEL 试验 | 第76页 |
5.2.9 统计学分析 | 第76页 |
5.3 结果 | 第76-82页 |
5.3.1 SW 对山羊胎盘滋养层细胞活性的影响 | 第76-77页 |
5.3.2 SW 诱导山羊胎盘滋养层细胞凋亡的形态学观察 | 第77-78页 |
5.3.3 DNA 片段化分析 | 第78页 |
5.3.4 SW 对山羊胎盘滋养层细胞凋亡率的影响 | 第78页 |
5.3.5 Caspase 级联反应在 SW 诱导山羊胎盘滋养层细胞凋亡中的作用 | 第78-79页 |
5.3.6 Caspase 抑制剂对 SW 诱导的山羊胎盘滋养层细胞凋亡的影响 | 第79-80页 |
5.3.7 SW 对山羊胎盘滋养层细胞 Fas 和 FasL 表达的影响 | 第80页 |
5.3.8 SW 促进山羊胎盘滋养层细胞中 Bax/Bcl-2 比值升高 | 第80-81页 |
5.3.9 SW 促进山羊胎盘滋养层细胞线粒体中 Cytochrome c 的释放 | 第81页 |
5.3.10 SW 选择性诱导妊娠山羊胎盘组织中滋养层细胞凋亡 | 第81-82页 |
5.4 讨论 | 第82-83页 |
5.5 小结 | 第83-84页 |
结论与创新点 | 第84-86页 |
参考文献 | 第86-99页 |
缩略词和中英文对照表 | 第99-101页 |
致谢 | 第101-102页 |
作者简介 | 第102-103页 |