| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-36页 |
| 1.1 马铃薯病毒病 | 第13-15页 |
| 1.2 马铃薯病毒病的检测 | 第15-17页 |
| 1.2.1 生物学方法 | 第15页 |
| 1.2.2 电子显微镜测定法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 血清学方法 | 第16页 |
| 1.2.4 核酸介导的分子生物学方法 | 第16-17页 |
| 1.3 马铃薯抗病毒基因工程研究进展 | 第17-26页 |
| 1.3.1 基因的来源 | 第17-22页 |
| 1.3.2 马铃薯抗病毒基因工程载体及其构建 | 第22-23页 |
| 1.3.3 马铃薯遗传转化体系的建立 | 第23-24页 |
| 1.3.4 马铃薯的遗传转化方法 | 第24-26页 |
| 1.4 寄主因子及其作用机制 | 第26-31页 |
| 1.5 RNA干扰(RNA interference)研究进展 | 第31-35页 |
| 1.5.1 RNAi的发现 | 第31-32页 |
| 1.5.2 RNAi的作用机制 | 第32-34页 |
| 1.5.3 RNAi在植物抗病虫害方面的应用 | 第34-35页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 广西冬种马铃薯病毒病害调查及病原病毒鉴定 | 第36-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第36页 |
| 2.1.2 田间调查与样品采集 | 第36-37页 |
| 2.1.3 间接ELISA法 | 第37页 |
| 2.1.4 总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.1.5 RT-PCR | 第38-39页 |
| 2.1.6 小RNA深度测序与序列分析 | 第39-40页 |
| 2.1.7 马铃薯S病毒cp基因的克隆和序列分析 | 第40页 |
| 2.2 结果与分析 | 第40-45页 |
| 2.2.1 田间发病率调查 | 第40-41页 |
| 2.2.2 ELISA方法检测结果 | 第41页 |
| 2.2.3 小RNA深度测序检测结果 | 第41-42页 |
| 2.2.4 RT-PCR检测结果 | 第42-43页 |
| 2.2.5 广西冬种马铃薯PVS的多样性分析 | 第43-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-47页 |
| 2.3.1 广西冬种马铃薯病毒的构成和来源 | 第45-46页 |
| 2.3.2 马铃薯S病毒的多样性及原因 | 第46页 |
| 2.3.3 不同方法检测马铃薯病毒病的比较 | 第46-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 马铃薯StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3基因的克隆和表达分析 | 第48-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-55页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第48页 |
| 3.1.2 培养基 | 第48页 |
| 3.1.3 总RNA的提取和第一链cDNA的合成 | 第48页 |
| 3.1.4 总DNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.1.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| 3.1.6 质粒DNA的提取 | 第50页 |
| 3.1.7 全长cDNA的克隆 | 第50-53页 |
| 3.1.8 全长基因组DNA的克隆 | 第53页 |
| 3.1.9 Southern 杂交 | 第53-54页 |
| 3.1.10 半定量 RT-PCR | 第54-55页 |
| 3.1.11 定量 RT-PCR | 第55页 |
| 3.1.12 生物信息学分析 | 第55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-62页 |
| 3.2.1 StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3全长cDNA的克隆 | 第55-57页 |
| 3.2.2 StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3全长基因组DNA的克隆 | 第57页 |
| 3.2.3 StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3的同源性分析 | 第57-60页 |
| 3.2.4 StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3基因的Southern杂交分析 | 第60-61页 |
| 3.2.5 StTOM1-A、StTOM1-B和StTOM3基因的表达分析 | 第61-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-63页 |
| 3.4 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 抑制StTOM1-B和tTOM3基因表达转基因植株的构建 | 第64-93页 |
| 4.1 材料与方法 | 第64-73页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第64页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 4.1.3 培养基 | 第65-66页 |
| 4.1.4 引物设计与合成 | 第66-67页 |
| 4.1.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第67页 |
| 4.1.6 目的基因的PCR扩增 | 第67页 |
| 4.1.7 植物双元表达载体pBIStT1-Ri(±)和pBIStT3-Ri(±)的构建 | 第67-68页 |
| 4.1.8 植物双元表达载体pBIStT1-StT3-dRi(±)的构建 | 第68-70页 |
| 4.1.9 马铃薯的遗传转化 | 第70-71页 |
| 4.1.10 马铃薯的转化及再生 | 第71-72页 |
| 4.1.11 转基因马铃薯的PCR鉴定 | 第72页 |
| 4.1.12 转基因马铃薯的Southern杂交鉴定 | 第72页 |
| 4.1.13 转基因马铃薯中StTOM1-B和StTOM3基因的实时荧光定量PCR分析 | 第72页 |
| 4.1.14 转基因马铃薯的抗病鉴定 | 第72-73页 |
| 4.2 结果与分析 | 第73-91页 |
| 4.2.1 植物双元表达载体pBIStT1B-Ri(±)的构建 | 第73-74页 |
| 4.2.2 植物双元表达载体pBIStT3-Ri(±)的构建 | 第74-75页 |
| 4.2.3 植物双元表达载体pBIStT1-StT3-dRi(±)的构建 | 第75-78页 |
| 4.2.4 马铃薯转基因植株的构建 | 第78-83页 |
| 4.2.5 植物双元表达载体在马铃薯中的转化分析 | 第83-84页 |
| 4.2.6 转基因植株的PCR检测 | 第84页 |
| 4.2.7 转基因植株的Southern杂交分析 | 第84-86页 |
| 4.2.8 转基因马铃薯中StTOM1-B和StTOM3基因的表达分析 | 第86-88页 |
| 4.2.9 转基因马铃薯中的抗病性分析 | 第88-91页 |
| 4.3 讨论 | 第91-92页 |
| 4.4 小结 | 第92-93页 |
| 第五章 结论 | 第93-95页 |
| 5.1 全文总结 | 第93-94页 |
| 5.2 创新点 | 第94页 |
| 5.3 问题与展望 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-113页 |
| 附录 | 第113-123页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第123页 |
