| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要英文缩写词表 | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| 1.1 肺癌的影响 | 第9-11页 |
| 1.2 EGFR和肿瘤 | 第11-13页 |
| 1.3 分子靶向性治疗 | 第13-14页 |
| 1.4 EGFR突变在非小细胞肺癌研究中的作用 | 第14-15页 |
| 1.5 EGFR高表达在非小细胞肺癌研究中的作用 | 第15页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第15-23页 |
| 2 材料与仪器 | 第23-25页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-33页 |
| 3.1 细胞复苏、培养及传代 | 第25页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR) | 第25-29页 |
| 3.2.1 实时荧光定量PCR原理 | 第25-26页 |
| 3.2.2 提取总RNA(使用总RNA提取试剂盒) | 第26-27页 |
| 3.2.3 RNA浓度和纯度测定(OD值测定) | 第27页 |
| 3.2.4 mRNA逆转录成cDNA | 第27-28页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 3.2.6 整理数据,统计结果 | 第29页 |
| 3.3 Western Blotting实验方法 | 第29-31页 |
| 3.3.1 蛋白的提取 | 第29页 |
| 3.3.2 蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第30-31页 |
| 3.3.4 转膜 | 第31页 |
| 3.3.5 免疫反应 | 第31页 |
| 3.3.6 化学发光 | 第31页 |
| 3.3.7 数据分析 | 第31页 |
| 3.4 筛选出EGFR高表达细胞株 | 第31-32页 |
| 3.4.1 用RFQ-PCR筛选出EGFR mRNA高表达细胞株 | 第31-32页 |
| 3.4.2 用Western Blotting筛选出EGFR蛋白高表达细胞株 | 第32页 |
| 3.5 筛选调控EGFR高表达的转录因子 | 第32页 |
| 3.6 用信号通路抑制剂筛选EGFR高表达的变异通路 | 第32-33页 |
| 4 结果分析 | 第33-46页 |
| 4.1 RNA浓度和纯度测定(OD值测定) | 第33-34页 |
| 4.2 蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 4.3 Western Blotting筛选EGFR高表达细胞株 | 第35-36页 |
| 4.4 RFQ-PCR筛选EGFR高表达细胞株 | 第36-38页 |
| 4.5 RFQ-PCR筛选调控EGFR高表达的转录因子 | 第38-40页 |
| 4.6 RFQ-PCR检测EGFR、Egr1高表达的变异通路 | 第40-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 本文创新点 | 第53页 |
| 攻读硕士学位期间参与的科研课题 | 第53页 |
| 发表的论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
