| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 乳腺上皮细胞及永生化研究进展 | 第9-18页 |
| 1.1 乳腺上皮细胞研究进展 | 第9-12页 |
| 1.1.1 乳腺的发育 | 第9页 |
| 1.1.2 乳腺上皮细胞的生长特性与形态学特征 | 第9-10页 |
| 1.1.3 乳腺上皮细胞的分离与体外培养方法 | 第10-11页 |
| 1.1.4 乳腺上皮细胞纯化方法 | 第11页 |
| 1.1.5 已建立的乳腺上皮细胞系 | 第11-12页 |
| 1.2 细胞永生化 | 第12-18页 |
| 1.2.1 物理化学法 | 第13页 |
| 1.2.2 癌基因和原癌基因 | 第13页 |
| 1.2.3 DNA 致瘤病毒 | 第13-15页 |
| 1.2.4 端粒酶 | 第15-18页 |
| 实验研究 | 第18-45页 |
| 第二章 原代山羊乳腺上皮细胞的分离与体外培养 | 第18-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-25页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4 乳腺细胞的分离培养 | 第19-20页 |
| 2.1.5 添加不同成分的培养液对原代乳腺上皮细胞培养的影响 | 第20页 |
| 2.1.6 乳腺上皮细胞的传代及纯化 | 第20页 |
| 2.1.7 山羊乳腺上皮细胞的冻存和解冻 | 第20-21页 |
| 2.1.8 原代培养乳腺上皮细胞角蛋白的免疫荧光染色 | 第21页 |
| 2.1.9 山羊乳腺上皮细胞体外诱导 β-酪蛋白表达的检测 | 第21-25页 |
| 2.2 结果 | 第25-29页 |
| 2.2.1 组织块法和消化法培养后乳腺上皮细胞的形态学观察 | 第25-26页 |
| 2.2.2 添加不同成分的培养液对原代乳腺上皮细胞培养的影响 | 第26页 |
| 2.2.3 山羊乳腺上皮细胞角蛋白的免疫荧光化学染色 | 第26-28页 |
| 2.2.4 GMECs 体外诱导 β-酪蛋白表达的检测结果 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-31页 |
| 2.3.1 乳腺组织的取材分离 | 第29-30页 |
| 2.3.2 山羊的乳腺上皮细胞原代培养方法的选择 | 第30页 |
| 2.3.3 乳腺上皮细胞纯化方法的选择 | 第30-31页 |
| 2.3.4 细胞培养液和生长因子的选择 | 第31页 |
| 2.4 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 山羊乳腺上皮细胞永生化研究 | 第32-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-36页 |
| 3.1.1 乳腺上皮细胞、hTERT 载体和感受态菌株 DH5α | 第32页 |
| 3.1.2 工具酶和主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第32页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 3.1.5 质粒 pCI-neo-hTERT 的提取 | 第33页 |
| 3.1.6 质粒 pCI-neo-hTERT 的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.7 质粒 pCI-neo-hTERT 的浓度以及纯度的测定 | 第34页 |
| 3.1.8 新霉素（G418）筛选浓度的测定 | 第34页 |
| 3.1.9 质粒 pCI-neo-hTERT 转染乳腺上皮细胞 | 第34页 |
| 3.1.10 阳性细胞克隆传代 | 第34-35页 |
| 3.1.11 hTERT-GMECs 形态学的观察 | 第35页 |
| 3.1.12 hTERT 端粒酶催化亚基的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.13 hTERT-GMECs 体外诱导 β-酪蛋白表达的检测 | 第36页 |
| 3.1.14 hTERT-GMECs 角蛋白的免疫荧光染色 | 第36页 |
| 3.2 结果 | 第36-43页 |
| 3.2.1 质粒 pCI-neo-hTERT 的酶切鉴定和扩增 | 第36页 |
| 3.2.2 质粒 pCI-neo-hTERT 浓度以及纯度的鉴定 | 第36页 |
| 3.2.3 G418 最佳筛选浓度的测定结果 | 第36-37页 |
| 3.2.4 质粒转染后阳性细胞的扩大培养 | 第37页 |
| 3.2.5 hTERT-GMECs 的形态学观察 | 第37-38页 |
| 3.2.6 RT-PCR 检测 hTERT-GMECs 中 hTERT 的表达 | 第38-39页 |
| 3.2.7 免疫荧光检测 hTERT-GMECs 中 hTERT 的表达 | 第39-41页 |
| 3.2.8 RT-PCR 检测 hTERT-GMECs 中 β-酪蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.9 Western blotting 检测 hTERT-GMECs 中 β-酪蛋白的表达 | 第42页 |
| 3.2.10 hTERT-GMECs 角蛋白的免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
