| 符号说明 | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-33页 |
| 1.1 氮素 | 第13-16页 |
| 1.1.1 氮素对植物生长发育的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.2 氮素在植物体内的含量与分布 | 第14-15页 |
| 1.1.3 农业中氮肥的使用现状 | 第15-16页 |
| 1.2 植物中氮素的吸收与转运 | 第16-20页 |
| 1.2.1 硝态氮的吸收与转运 | 第16-20页 |
| 1.2.1.1 NRT1家族 | 第17-19页 |
| 1.2.1.2 NRT2家族 | 第19-20页 |
| 1.2.2 氨态氮的吸收与转运 | 第20页 |
| 1.3 植物中氮素的同化 | 第20-22页 |
| 1.3.1 硝态氮的同化 | 第21-22页 |
| 1.3.1.1 硝酸盐的还原 | 第21页 |
| 1.3.1.2 亚硝酸盐的还原 | 第21-22页 |
| 1.3.2 铵态氮的同化 | 第22页 |
| 1.4 硝态氮调控基因 | 第22-24页 |
| 1.4.1 CHL1 | 第23页 |
| 1.4.2 NLP7 | 第23-24页 |
| 1.4.3 CIPK8与CIPK23 | 第24页 |
| 1.4.4 LBD37/38/39 | 第24页 |
| 1.5 硝态氮对植物根系生长发育的调控 | 第24-27页 |
| 1.5.1 高浓度硝态氮对侧根生长的抑制效应 | 第25-26页 |
| 1.5.2 局部硝态氮对侧根生长的刺激效应 | 第26页 |
| 1.5.3 高碳氮比对侧根起始的抑制效应 | 第26-27页 |
| 1.5.4 硝态氮诱导的依赖于microRNA的调控模型 | 第27页 |
| 1.5.5 硝态氮对主根生长的促进作用 | 第27页 |
| 1.6 硝态氮调控基因筛选相关技术 | 第27-32页 |
| 1.6.1 硝态氮调控基因筛选系统 | 第27-28页 |
| 1.6.2 EMS诱变 | 第28-29页 |
| 1.6.3 图位克隆 | 第29-32页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-38页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 2.1.2 试剂 | 第33-36页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第36页 |
| 2.1.4 引物 | 第36-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-48页 |
| 2.2.1 拟南芥的培养 | 第38-39页 |
| 2.2.1.1 种子的消毒处理 | 第38页 |
| 2.2.1.2 材料的固体培养 | 第38-39页 |
| 2.2.1.3 材料的液体培养 | 第39页 |
| 2.2.2 拟南芥的EMS诱变 | 第39-40页 |
| 2.2.2.1 EMS用量的计算 | 第39页 |
| 2.2.2.2 播种规模的计算 | 第39页 |
| 2.2.2.3 EMS诱变 | 第39-40页 |
| 2.2.3 突变体的荧光筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.3.1 筛选群体 | 第40页 |
| 2.2.3.2 材料的准备 | 第40页 |
| 2.2.3.3 目的突变体的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.3.4 候选突变体的确认 | 第41页 |
| 2.2.4 图位克隆 | 第41-43页 |
| 2.2.4.1 材料的准备 | 第41页 |
| 2.2.4.2 基因组的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.4.3 PCR扩增 | 第42页 |
| 2.2.4.4 粗定位 | 第42页 |
| 2.2.4.5 精细定位 | 第42-43页 |
| 2.2.5 全基因组测序 | 第43页 |
| 2.2.6 荧光鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.6.1 突变基因显隐性的鉴定 | 第43页 |
| 2.2.6.2 等位突变的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.6.3 不同氮源条件下的荧光鉴定 | 第44页 |
| 2.2.7 突变体的背景清除 | 第44-45页 |
| 2.2.8 植物体内硝态氮含量的测定 | 第45-46页 |
| 2.2.8.1 标准曲线的制作 | 第45页 |
| 2.2.8.2 硝态氮含量的测定 | 第45-46页 |
| 2.2.9 硝态氮响应基因表达量的测定 | 第46-47页 |
| 2.2.10 表型鉴定 | 第47页 |
| 2.2.11 根系鉴定 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-60页 |
| 3.1 拟南芥硝态氮调控基因突变体的荧光筛选 | 第48-49页 |
| 3.2 突变基因的显隐性鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 突变基因的图位克隆 | 第50-52页 |
| 3.3.1 C9突变体的图位克隆 | 第50-51页 |
| 3.3.1.1 粗定位 | 第50-51页 |
| 3.3.1.2 精细定位 | 第51页 |
| 3.3.2 E7突变体的图位克隆 | 第51-52页 |
| 3.3.2.1 粗定位 | 第51-52页 |
| 3.3.2.2 精细定位 | 第52页 |
| 3.4 突变基因的确定 | 第52-54页 |
| 3.4.1 等位突变的荧光鉴定 | 第52页 |
| 3.4.2 突变位点的确定 | 第52-54页 |
| 3.5 突变体中硝态氮响应基因表达量的测定 | 第54-55页 |
| 3.6 突变体中硝态氮含量的测定 | 第55页 |
| 3.7 突变体在不同氮源条件下的荧光鉴定 | 第55-56页 |
| 3.8 突变体表型鉴定 | 第56-57页 |
| 3.9 突变体根系鉴定 | 第57-60页 |
| 3.9.1 不同氮源条件下根形态鉴定 | 第57-58页 |
| 3.9.2 碳氮比梯度条件下根形态鉴定 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 4.1 拟南芥硝态氮调控基因筛选系统的优势 | 第60页 |
| 4.2 突变基因在硝态氮调控中的作用 | 第60-61页 |
| 4.3 AtBNRG1在拟南芥生长发育中的调控作用 | 第61页 |
| 4.4 AtBNRG1与其他硝态氮调控基因的关系 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |