| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 TALE 的概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 TALE 蛋白的结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 TALE 蛋白对特异 DNA 序列的识别 | 第11-12页 |
| 1.2 基因组定点编辑概述 | 第12-14页 |
| 1.2.1 人工 TALE 核酸酶的出现 | 第13页 |
| 1.2.2 应用 TALE 人工核酸酶实现基因编辑的机制 | 第13-14页 |
| 1.3 TALE 蛋白重复片段的组装 | 第14-17页 |
| 1.3.1 应用常规同尾内切酶的构建方法 | 第15页 |
| 1.3.2 基于 IIs 型内切酶的构建方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 其他构建方法 | 第16-17页 |
| 1.4 TALEN 骨架的结构优化 | 第17-18页 |
| 1.4.1 TALEN 骨架 N 端长度、C 端长度和 spacer 长度的优化 | 第17页 |
| 1.4.2 FokI 切割域的优化 | 第17页 |
| 1.4.3 SunnyTALEN | 第17-18页 |
| 1.5 TALEN 介导的基因组编辑的研究进展 | 第18-19页 |
| 第二章 TALE 人工核酸酶的构建 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 工具酶和试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 TALEN 表达载体骨架载体的构建 | 第21页 |
| 2.2.2 TALE 重复单元单体质粒库的构建 | 第21页 |
| 2.2.3 TALE 重复单元四聚体质粒库的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.4 靶向鼠 Rosa26 基因的 TALEN 表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.3.1 pST-TALEN-backbone 的构建 | 第23-24页 |
| 2.3.2 TALE 重复单元单体质粒库的构建 | 第24页 |
| 2.3.3 TALE 重复单元四聚体质粒库的构建 | 第24-26页 |
| 2.3.4 靶向小鼠 Rosa26 基因的 TALEN 表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 TALE 人工核酸酶的结构优化 | 第28-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第28-29页 |
| 3.1.2 工具酶和试剂 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 具有不同长度 N 端的 TALEN 哺乳动物及酵母表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.2 酵母报告载体和哺乳动物绿色荧光报告载体的构建 | 第30页 |
| 3.2.3 具有不同长度 N 端的 TALEN 在酵母中的活性检测 | 第30页 |
| 3.2.4 具有不同长度 N 端的 TALEN 在人 293T 细胞中的活性检测 | 第30页 |
| 3.2.5 C 端及 FokI 结构的优化（SunnyTALEN 的构建） | 第30-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 3.3.1 具有不同长度 N 端 TALEN 表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 具有不同长度 N 端的 TALEN 在酵母中的活性验证 | 第32-34页 |
| 3.3.4 具有不同长度 N 端 TALEN 在人 293T 细胞中的活性检测 | 第34-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 结论 | 第38-39页 |
| 4.1 研究结论 | 第38页 |
| 4.2 本研究的创新点 | 第38页 |
| 4.3 还需进行的研究 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 附录 | 第45-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
