| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 宿主限制因子 Tetherin 的研究现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 Tetherin 的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 Tetherin 的抗病毒机制 | 第14-16页 |
| 1.2 HIV-1 Vpu 的研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.1 HIV-1 简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Vpu 的结构与离子通道活性 | 第17-18页 |
| 1.2.3 Vpu 对 Tetherin 拮抗作用 | 第18-19页 |
| 1.3 HIV-1 病毒释放过程相关调控因素的研究现状 | 第19-23页 |
| 1.3.1 钙离子对 HIV-1 病毒释放的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.3.2 细胞膜去极化与 HIV-1 病毒释放 | 第20-23页 |
| 1.3.2.1 Vpu 引起的细胞膜去极化与其促病毒释放的关系 | 第20-21页 |
| 1.3.2.2 电压依赖钙离子通道简介 | 第21-23页 |
| 1.3.2.3 电压依赖钙离子通道在免疫细胞中的表达 | 第23页 |
| 1.4 几类可能作用于 Tetherin 的水解酶简介 | 第23-26页 |
| 1.4.1 磷脂酶 | 第23-25页 |
| 1.4.1.1 磷脂酶简介 | 第23页 |
| 1.4.1.2 GPI 锚定蛋白与磷脂酶 | 第23-24页 |
| 1.4.1.3 磷脂酶作用于 Tetherin 的可行性的相关研究现状 | 第24-25页 |
| 1.4.2 基质金属蛋白酶 | 第25页 |
| 1.4.2.1 基质金属蛋白酶简介 | 第25页 |
| 1.4.2.2 Tetherin 与基质金属蛋白酶的相互作用 | 第25页 |
| 1.4.3 弗林蛋白酶（Furin） | 第25-26页 |
| 1.5 论文设计与实验方案 | 第26-29页 |
| 1.5.1 论文目的 | 第26-27页 |
| 1.5.2 实验设计 | 第27-29页 |
| 1.5.2.1 Vpu 的离子通道活性对细胞内钙浓度的影响 | 第27页 |
| 1.5.2.2 细胞内钙浓度对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第27-28页 |
| 1.5.2.3 水解酶对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第29-40页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第29-31页 |
| 2.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第32-34页 |
| 2.3.2 细胞培养及转染 | 第34页 |
| 2.3.3 蛋白电泳与免疫印迹 | 第34-35页 |
| 2.3.4 稳定表达细胞系的构建 | 第35页 |
| 2.3.5 细胞周期同步化 | 第35-36页 |
| 2.3.6 细胞内游离钙离子浓度测定 | 第36页 |
| 2.3.7 流式细胞术 | 第36-37页 |
| 2.3.8 病毒的收集及含量测定 | 第37页 |
| 2.3.9 RNA 干扰及效果评价 | 第37-40页 |
| 2.3.9.1 siRNA 的合成与转染 | 第37-38页 |
| 2.3.9.2 细胞总 RNA 的提取 | 第38页 |
| 2.3.9.3 RNA 逆转录为 cDNA | 第38页 |
| 2.3.9.4 荧光定量 PCR | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-65页 |
| 3.1 Vpu 的离子通道活性对细胞内钙浓度的影响 | 第40-47页 |
| 3.1.1 Vpu 及 Vpu 突变体的 RFP 融合表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.2 验证 Vpu 对细胞内钙浓度的影响 | 第42-45页 |
| 3.1.3 验证 Vpu 对细胞钙浓度的上调与 Vpu 自身离子通道的相关性 | 第45-46页 |
| 3.1.4 在稳定表达 Vpu 的 293T 细胞系中验证 Vpu 对细胞钙浓度的上调现象 | 第46-47页 |
| 3.2 细胞内钙浓度对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第47-59页 |
| 3.2.1 广谱型钙通道拮抗剂 CdCl2对病毒释放的影响 | 第48-50页 |
| 3.2.2 T 型 VDCC 对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第50-54页 |
| 3.2.2.1 T 型 VDCC 的亚基α1G，α1H 在 293T、Hela 细胞中的内源表达检测 | 第50-51页 |
| 3.2.2.2 T 型 VDCC 拮抗剂 Ethosuximide 对病毒释放的影响 | 第51页 |
| 3.2.2.3 沉默 T 型 VDCC 表达后检测病毒释放变化 | 第51-53页 |
| 3.2.2.4 T 型 VDCC 拮抗剂 Ethosuximide 对细胞表面 Tetherin 表达量的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.3 L 型 VDCC 对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第54-59页 |
| 3.2.3.1 L 型 VDCC 的亚基α1C，α1D 在 293T、Hela 细胞中的内源表达检测 | 第54-55页 |
| 3.2.3.2 L 型 VDCC 拮抗剂 Nifedipine 对病毒释放的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3.3 沉默 L 型 VDCC 表达后检测病毒释放变化 | 第56-58页 |
| 3.2.3.4 L 型 VDCC 拮抗剂 Nifedipine 对细胞表面 Tetherin 表达量的影响 | 第58-59页 |
| 3.3 水解酶对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第59-65页 |
| 3.3.1 磷脂酶 C 对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第59-61页 |
| 3.3.2 磷脂酶 D 对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.3 MMP 对 Vpu 拮抗 Tetherin 功能的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.4 验证 Tetherin 的潜在弗林蛋白酶切割位点的可行性 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
