| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 (R)-香茅醛的合成及应用 | 第12-20页 |
| 1.1.1 (R)-香茅醛的用途 | 第12-13页 |
| 1.1.2 化学法合成(R)-香茅醛的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.3 生物催化柠檬醛合成(R)-香茅醛的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2 烯键还原酶的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 烯键还原酶的分类 | 第20页 |
| 1.2.2 老黄酶家族酶的催化机制 | 第20-21页 |
| 1.2.3 烯键还原酶的底物谱及工业应用 | 第21-25页 |
| 1.3 本课题研究内容与意义 | 第25-26页 |
| 第2章 不对称催化柠檬醛生成(R)-香茅醛的烯键还原酶的筛选及酶学性质的研究 | 第26-51页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 实验材科 | 第26-28页 |
| 2.2.1 质粒与菌株 | 第26页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 细菌培养、蛋白诱导及菌体收集 | 第28页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达与纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第31-32页 |
| 2.3.5 蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| 2.3.6 酶活测定的标准方法 | 第32-33页 |
| 2.3.7 不同pH缓冲溶液的配制 | 第33-34页 |
| 2.3.8 烯键还原酶的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.9 酶学性质分析方法 | 第35-36页 |
| 2.3.10 催化样品的检测方法 | 第36-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 烯键还原酶的筛选 | 第38-41页 |
| 2.4.2 OYE2p的生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 2.4.3 OYE2p的辅酶偏好性分析 | 第43-44页 |
| 2.4.4 OYE2p的表达与纯化 | 第44页 |
| 2.4.5 OYE2p的酶学性质分析 | 第44-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第3章 OYE2p不对称催化柠檬醛生成香茅醛的对映体选择性的研究 | 第51-62页 |
| 3.1 前言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51页 |
| 3.2.1 菌株信息 | 第51页 |
| 3.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 柠檬醛的两种顺反异构体的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.2 柠檬醛中顺反异构体的比例对OYE2p催化反应的对映体选择性的影响试验 | 第52页 |
| 3.3.3 pH环境对OYE2p催化反应的对映体选择性的影响试验 | 第52-53页 |
| 3.3.4 OYE2p催化香叶醛制备(R)-香茅醛的试验方法 | 第53页 |
| 3.3.5 OYE2p在最适pH条件下催化(E,Z)-柠檬醛的试验方法 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-61页 |
| 3.4.1 橙花醇((Z)-柠檬醛)和香叶醛((E)-柠檬醛)的制备 | 第54-55页 |
| 3.4.2 柠檬醛中顺反异构体的比例对OYE2p催化反应的对映体选择性的影响 | 第55-57页 |
| 3.4.3 不同的反应pH对OYE2p催化反应的对映体选择性的影响 | 第57-59页 |
| 3.4.4 OYE2p催化香叶醛合成(R)-香茅醛的研究 | 第59-60页 |
| 3.4.5 OYE2p催化柠檬醛合成(R)-香茅醛的研究 | 第60-61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第4章 烯键还原酶OYE2p与甲酸脱氢酶FDH的融合表达及全细胞催化柠檬醛合成(R)-香茅醛的研究 | 第62-75页 |
| 4.1 前言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63页 |
| 4.2.1 质粒与菌株 | 第63页 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器设备 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 4.3.1 E.coli (pET21d-oye2p)全细胞催化柠檬醛试验 | 第63-64页 |
| 4.3.2 E.coli (pET21d-oye2p)全细胞催化柠檬醛的pH缓冲液和辅酶再生方式的选择 | 第64页 |
| 4.3.3 OYE2p与FDH融合表达质粒的构建 | 第64-65页 |
| 4.3.4 E.coli菌株的构建及融合蛋白的表达 | 第65页 |
| 4.3.5 融合表达菌的全细胞催化柠檬醛试验 | 第65-66页 |
| 4.3.6 E.coli (pET21d-fdh-(ggggs)_3-oye2p)全细胞催化柠檬醛试验 | 第66页 |
| 4.3.7 甲苯-PBS缓冲液两相体系中E.coli (pET21d-fdh-(ggggs)_3-oye2p)全细胞催化柠檬醛试验 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-74页 |
| 4.4.1 E.coli (pET21d-oye2p)全细胞催化柠檬醛的产物和副产物的生成情况分析 | 第66-67页 |
| 4.4.2 缓冲液和辅酶再生方式对E. coli (pET21d-oye2p)全细胞催化柠檬醛的产物和副产物生成的影响 | 第67-69页 |
| 4.4.3 OYE2p与FDH在E.coli中的融合表达 | 第69-70页 |
| 4.4.4 融合表达菌全细胞催化柠檬醛的产物和副产物生成情况的分析 | 第70-72页 |
| 4.4.5 E.coli (pET21d-fdh-(ggggs)_3-oye2p)全细胞催化柠檬醛的过程研究 | 第72页 |
| 4.4.6 甲苯-PBS缓冲液两相体系中E.coli (pET21d-fdh-(ggggs)_3-oye2p)全细胞催化柠檬醛的研究 | 第72-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第5章 总结与展望 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 硕士期间论文成果 | 第84-85页 |
| 卷内备考表 | 第85页 |
