| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 淀粉酶概述 | 第11-17页 |
| 1.1.1 淀粉酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 淀粉酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.3 淀粉酶的工业应用 | 第13-17页 |
| 1.1.3.1 在焙烤工业中的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.3.2 在淀粉工业中的应用 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 在纺织退浆中的应用 | 第15页 |
| 1.1.3.4 在造纸中的应用 | 第15页 |
| 1.1.3.5 在清洁剂中的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.3.6 在临床医药中的应用 | 第16页 |
| 1.1.3.7 在啤酒酿造中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 酸性α-淀粉酶的概述 | 第17-23页 |
| 1.2.1 酸性α-淀粉酶的来源 | 第17-19页 |
| 1.2.2 酸性α-淀粉酶的作用机制 | 第19页 |
| 1.2.3 酸性α-淀粉酶的结构 | 第19-21页 |
| 1.2.4 酸性α-淀粉酶的酶学特性 | 第21-23页 |
| 1.2.4.1 酸性α-淀粉酶的耐酸性 | 第21-22页 |
| 1.2.4.2 酸性α-淀粉酶的耐热性 | 第22-23页 |
| 1.3 酸性α-淀粉酶的基因克隆与分子改造 | 第23-25页 |
| 1.3.1 酸性α-淀粉酶的基因克隆 | 第23-24页 |
| 1.3.2 酸性α-淀粉酶的分子定向改造 | 第24-25页 |
| 1.4 选题背景和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 SF-8 菌株的培养条件和生理生化特性 | 第27-37页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.2.1 发酵培养基 | 第27页 |
| 2.1.2.2 活化平板培养基 | 第27页 |
| 2.2 菌株培养及生长情况研究 | 第27-28页 |
| 2.3 菌株生理实验 | 第28-29页 |
| 2.3.1 革兰氏染色实验 | 第28页 |
| 2.3.2 芽孢染色实验 | 第28页 |
| 2.3.3 电镜观察 | 第28页 |
| 2.3.4 16S rDNA的分子生物学鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 酶活的测定 | 第29页 |
| 2.5 实验结果和讨论 | 第29-35页 |
| 2.5.1 菌株培养及生长实验结果 | 第29-31页 |
| 2.5.2 革兰氏染色结果 | 第31-32页 |
| 2.5.3 芽孢染色结果 | 第32-33页 |
| 2.5.4 电镜观察结果 | 第33页 |
| 2.5.5 16S rDNA的分子生物学鉴定结果 | 第33-35页 |
| 2.6 小结 | 第35-37页 |
| 第三章 SF-8 菌株耐热酸性α-淀粉酶基因克隆 | 第37-49页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第37-42页 |
| 3.1.1 菌株 | 第37页 |
| 3.1.2 药品和试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.1.4.1 直接PCR法克隆耐热酸性α-淀粉酶基因 | 第38-39页 |
| 3.1.4.2 SF-8 菌株基因文库的构建和耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆 | 第39-42页 |
| 3.1.4.2.1 SF-8 菌株培养 | 第39页 |
| 3.1.4.2.2 SF-8 基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| 3.1.4.2.3 SF-8 基因组DNA纯化 | 第40页 |
| 3.1.4.2.4 SF-8 基因组DNA酶切和片段回收 | 第40页 |
| 3.1.4.2.5 pUC19 质粒提取和酶切 | 第40页 |
| 3.1.4.2.6 pUC19 质粒去磷酸化回收 | 第40-41页 |
| 3.1.4.2.7 SF-8 基因组DNA片段与pUC19 质粒连接 | 第41页 |
| 3.1.4.2.8 连接产物的电击转化和转化子筛选 | 第41-42页 |
| 3.2 实验结果和讨论 | 第42-47页 |
| 3.2.1 直接PCR法克隆耐热酸性α-淀粉酶基因结果 | 第42页 |
| 3.2.2 SF-8 基因组DNA提取结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 SF-8 基因组DNA酶切回收结果 | 第43-44页 |
| 3.2.4 pUC19 质粒提取和酶切结果 | 第44-45页 |
| 3.2.5 pUC19 质粒去磷酸化回收结果 | 第45页 |
| 3.2.6 SF-8 基因组DNA片段回收 | 第45-46页 |
| 3.2.7 转化子筛选结果 | 第46-47页 |
| 3.3 小结 | 第47-49页 |
| 第四章 耐热酸性α-淀粉酶的分离纯化 | 第49-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 4.1.1 菌株 | 第49页 |
| 4.1.2 药品和试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 培养基 | 第49页 |
| 4.1.4 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.1.4.1 SF-8 的发酵培养 | 第50页 |
| 4.1.4.2 SF-8 耐热酸性α-淀粉酶粗酶液的制备 | 第50页 |
| 4.1.4.3 粗酶液酶活的测定 | 第50页 |
| 4.1.4.4 Bradford法粗酶液蛋白浓度的测定 | 第50-51页 |
| 4.1.4.5 硫酸铵分级盐析 | 第51页 |
| 4.1.4.6 离子交换层析 | 第51-52页 |
| 4.1.4.6.1 样品的处理 | 第51页 |
| 4.1.4.6.2 CM阳离子交换层析 | 第51页 |
| 4.1.4.6.3 DEAE阴离子交换层析 | 第51-52页 |
| 4.1.4.7 蛋白电泳检测 | 第52-53页 |
| 4.1.4.8 酶的活性染色 | 第53页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第53-58页 |
| 4.2.1 BSA标准曲线绘制结果 | 第53-54页 |
| 4.2.2 硫酸铵分级盐析结果 | 第54页 |
| 4.2.3 CM阳离子交换层析结果 | 第54-55页 |
| 4.2.4 DEAE阴离子交换层析结果 | 第55-56页 |
| 4.2.5 耐热酸性α-淀粉酶的分离纯化结果 | 第56页 |
| 4.2.6 耐热酸性α-淀粉酶的电泳鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4.2.7 耐热酸性α-淀粉酶的活性染色结果 | 第57-58页 |
| 4.3 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 耐热酸性α-淀粉酶学性质研究 | 第59-65页 |
| 5.1 材料与方法 | 第59-60页 |
| 5.1.1 耐热酸性α-淀粉酶来源 | 第59页 |
| 5.1.2 药品和试剂 | 第59页 |
| 5.1.3 最适反应温度和pH值的测定 | 第59页 |
| 5.1.4 温度和pH值对酶稳定性的影响 | 第59-60页 |
| 5.1.5 金属离子对酶反应的影响 | 第60页 |
| 5.1.6 不同保存温度对酶活的影响 | 第60页 |
| 5.2 实验结果与讨论 | 第60-64页 |
| 5.2.1 酶反应的最适温度 | 第60-61页 |
| 5.2.2 酶反应的最适pH | 第61-62页 |
| 5.2.3 温度和pH对酶活的影响 | 第62-63页 |
| 5.2.4 金属离子对酶反应的影响 | 第63页 |
| 5.2.5 不同保存温度对酶活的影响 | 第63-64页 |
| 5.3 小结 | 第64-65页 |
| 第六章 实验结果和展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72页 |
