| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1、前言 | 第11-18页 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎概述 | 第11-12页 |
| 1.2 IBV病原简介 | 第12-13页 |
| 1.2.1 IBV的分类与病毒形态 | 第12页 |
| 1.2.2 IBV的基因组结构特征 | 第12页 |
| 1.2.3 IBV编码的结构蛋白及生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3.1 纤突蛋白（S蛋白） | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 N蛋白 | 第13页 |
| 1.2.3.3 M蛋白 | 第13页 |
| 1.3 IBV的变异机理 | 第13-14页 |
| 1.4 IBV的分型 | 第14页 |
| 1.4.1 临床分型 | 第14页 |
| 1.4.2 基因分型 | 第14页 |
| 1.4.3 血清型分型 | 第14页 |
| 1.5 IBV诊断方法 | 第14-16页 |
| 1.5.1 鸡胚接种 | 第14-15页 |
| 1.5.2 血清学实验 | 第15页 |
| 1.5.2.1 ELISA实验 | 第15页 |
| 1.5.2.2 免疫荧光实验 | 第15页 |
| 1.5.2.3 其他血清学检测技术 | 第15页 |
| 1.5.3 分子生物学实验 | 第15-16页 |
| 1.6 IB疫苗 | 第16页 |
| 1.6.1 IB弱毒疫苗 | 第16页 |
| 1.6.2 灭活苗 | 第16页 |
| 1.6.3 基因工程苗 | 第16页 |
| 1.7 其他鸡呼吸道疾病的病原 | 第16-17页 |
| 1.8 实验目的和意义 | 第17-18页 |
| 2、材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 病料来源 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 试剂配置 | 第19页 |
| 2.1.6 引物的设计 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 病毒的分离与鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.1.1 病料的选择与处理 | 第20页 |
| 2.2.1.2 病毒的初步鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 病毒的纯化 | 第21页 |
| 2.2.2 IBV流行株序列的测定与遗传进化分析 | 第21-25页 |
| 2.2.2.1 基因的RT-PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR产物的纯化回收 | 第22页 |
| 2.2.2.3 RT-PCR回收产物与PMD 18-T载体的连接 | 第22页 |
| 2.2.2.4 连接产物的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.2.5 菌液PCR鉴定及序列测定 | 第23页 |
| 2.2.2.6 基因序列的确定及系统进化树分析 | 第23-25页 |
| 2.2.3 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第25-29页 |
| 2.2.3.1 引物、探针设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 柱式提取操作方法提取病毒RNA | 第26页 |
| 2.2.3.3 配置PCR扩增反应体系 | 第26-27页 |
| 2.2.3.4 荧光定量RT-PCR | 第27页 |
| 2.2.3.5 标准曲线的绘制 | 第27页 |
| 2.2.3.6 特异性实验 | 第27-28页 |
| 2.2.3.7 敏感性实验 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-43页 |
| 3.1 病毒的分离与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.1.1 实验室送检病料结果统计 | 第29页 |
| 3.1.2 IBV病料RT-PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 3.2 IBV流行株序列的测定与遗传进化分析 | 第30-38页 |
| 3.2.1 IBV分离株S1、M、N基因的RT-PCR扩增结果 | 第30-32页 |
| 3.2.1.1 S1基因的扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.1.2 M基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.1.3 N基因的扩增 | 第32页 |
| 3.2.2 S1基因序列比对分析 | 第32-36页 |
| 3.2.2.1 S1核苷酸同源性比较分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2.2 S1氨基酸同源性比较分析 | 第33-36页 |
| 3.2.3 M基因序列比对分析 | 第36-37页 |
| 3.2.4 N基因序列比对分析 | 第37-38页 |
| 3.3 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR结果分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR结果读取 | 第38-39页 |
| 3.3.2 特异性实验结果分析 | 第39页 |
| 3.3.3 敏感性实验结果分析 | 第39-41页 |
| 3.3.4 标准曲线 | 第41-42页 |
| 3.3.5 临床病料的检测结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 山东省IBV流行株的分离鉴定 | 第43页 |
| 4.2 IBV流行株序列测定与遗传进化分析 | 第43-44页 |
| 4.3 IBV、NDV、AIV-H9三重荧光定量RT-PCR | 第44-45页 |
| 5.结论 | 第45-46页 |
| 6 参考文献 | 第46-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介及论文发表情况 | 第57页 |
