| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-28页 |
| 第一章 体细胞核移植中供体核的重编程 | 第13-16页 |
| ·重编程简介 | 第13页 |
| ·体细胞核移植过程中的重编程 | 第13-16页 |
| ·体细胞核移植的相关背景 | 第13-14页 |
| ·克隆动物发育异常与供体核不完全重编程的关系 | 第14页 |
| ·体细胞核移植后供体核重编程的影响因素 | 第14-16页 |
| 第二章 连接组蛋白决定染色体结构与功能 | 第16-23页 |
| ·哺乳动物中连接组蛋白简介 | 第16-17页 |
| ·连接组蛋白家族 | 第17-18页 |
| ·连接组蛋白结构 | 第18-19页 |
| ·连接组蛋白表达 | 第19页 |
| ·连接组蛋白功能 | 第19-23页 |
| ·连接组蛋白在染色体高级结构形成中的作用 | 第19-20页 |
| ·连接组蛋白与染色体结合的动力学变化 | 第20-21页 |
| ·不同亚型连接组蛋白的功能分析 | 第21页 |
| ·连接组蛋白与核小体的比率影响核小体上重复DNA 序列长度 | 第21-22页 |
| ·不同Hl 亚型参与基因表达调控 | 第22-23页 |
| 第三章 卵特异型连接组蛋白H1foo 在核移植重编程中的作用 | 第23-28页 |
| ·H1foo 基因的发现 | 第23页 |
| ·H1foo 的分子结构 | 第23-24页 |
| ·H1foo 的表达特点 | 第24-25页 |
| ·H1foo 的功能 | 第25-28页 |
| ·参与精子染色体的重构 | 第25-26页 |
| ·参与核移植中供体核的重编程 | 第26-28页 |
| 试验研究 | 第28-65页 |
| 第四章 H1foo 在卵母细胞成熟过程中的作用 | 第28-51页 |
| ·材料和方法 | 第28-38页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·微量卵中基因扩增条件优化 | 第29-30页 |
| ·微量牛卵中H1foo CDS 全长克隆及鉴定 | 第30-32页 |
| ·H1foo 真核表达载体构建、转染及 RT-PCR、Western Blotting 表达鉴定 | 第32-35页 |
| ·H1foo 及Venus 体外转录 | 第35-36页 |
| ·H1foo siRNAs 合成及共转染筛选有效干扰序列 | 第36-37页 |
| ·H1foo mRNA 及siRNA 显微注射 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR 检测卵母细胞H1foo 表达及成熟统计 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-48页 |
| ·透明带去除、DNase 处理对基因扩增效率的影响 | 第38-39页 |
| ·不同量卵中β-actin 基因片段的扩增效率 | 第39-40页 |
| ·微量牛卵中H1foo CDS 全长克隆及鉴定 | 第40页 |
| ·pVenus-H1foo 真核表达载体鉴定 | 第40-41页 |
| ·荧光显微镜下观察瞬时转染结果 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR、Western Blotting 鉴定重组质粒pVenus-H1foo 的表达 | 第42-43页 |
| ·H1foo-Venus 及Venus 体外转录产物的纯度、浓度检测 | 第43页 |
| ·不同siRNAs 对H1foo mRNA 及蛋白表达干扰效率检测 | 第43-46页 |
| ·卵母细胞中H1foo 表达的增强、减弱及其对成熟率的影响 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| ·微量牛卵中基因片段扩增体系、条件的优化 | 第50页 |
| ·H1foo CDS 全长克隆及真核表达载体构建 | 第50页 |
| ·H1foo 有效siRNAs 片段的筛选 | 第50页 |
| ·H1foo 表达对卵母细胞成熟率的影响 | 第50-51页 |
| 第五章 核移植过程中连接组蛋白互换现象的观察 | 第51-65页 |
| ·材料和方法 | 第51-55页 |
| ·仪器和试剂 | 第51页 |
| ·H1e CDS 全长克隆及真核表达载体构建 | 第51-53页 |
| ·pDsRed1-H1e 转染Hela 细胞及RT-PCR 表达鉴定 | 第53页 |
| ·pDsRed1-H1e 转染牛耳成纤维细胞并筛选稳定表达细胞株 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR 及Western Blotting 检测外源H1e 表达 | 第54页 |
| ·H1foo mRNA 显微注射 | 第54-55页 |
| ·核移植、电融合及连接组蛋白互换观察 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·H1e CDS 克隆及真核表达载体pDsRed1-H1e 鉴定 | 第55-56页 |
| ·pDsRed1-H1e 在Hela 细胞中的瞬时表达 | 第56-57页 |
| ·稳定转染pDsRed1-H1e 的牛成纤维细胞株筛选 | 第57-58页 |
| ·稳定转染细胞株中RFP-H1e mRNA 和蛋白的表达 | 第58-59页 |
| ·核移植后供体细胞核中H1e 的消失 | 第59-60页 |
| ·核移植后H1foo 在供体细胞核中的积累 | 第60-61页 |
| ·核移植后H1foo 对H1e 的置换 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| ·H1e CDS 全长克隆及真核表达载体构建 | 第63页 |
| ·H1e-RFP 稳定表达细胞株的筛选 | 第63页 |
| ·体细胞型连接组蛋白H1e 的消失 | 第63页 |
| ·卵特异型连接组蛋白H1foo 的积累 | 第63页 |
| ·核移植后H1foo 对H1e 的置换 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65页 |
| 本研究的创新点与进一步研究的课题 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
