| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 哈维氏弧菌研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 哈维氏弧菌的生物学性状 | 第12页 |
| 1.1.2 哈维氏弧菌的流行病学及致病因子 | 第12-14页 |
| 1.1.3 哈维氏弧菌的病害防治及现状 | 第14-15页 |
| 1.2 喹诺酮类药物及耐药机制的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 喹诺酮类药物的发展 | 第15-16页 |
| 1.2.2 喹诺酮类药物作用机制及靶位 | 第16页 |
| 1.2.3 细菌对喹诺酮类药物的耐药机制 | 第16-18页 |
| 1.2.4 喹诺酮类药物在水产养殖中的应用及水产细菌耐药概况 | 第18-19页 |
| 1.3 转录组学及其在细菌耐药性研究中的应用 | 第19-21页 |
| 1.3.1 转录组学概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 转录组测序在细菌耐药性中的研究 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究技术路线 | 第21页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 哈维氏弧菌喹诺酮耐药株的诱导、筛选及生物学特性研究 | 第22-31页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基和试剂的配制 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 倍比稀释法测定药物最低抑菌浓度（MIC） | 第23-24页 |
| 2.2.2 多步诱导法诱导耐药菌株 | 第24-25页 |
| 2.2.3 交叉耐药性试验 | 第25页 |
| 2.2.4 耐药稳定性试验 | 第25-26页 |
| 2.2.5 生物学特性分析 | 第26页 |
| 2.2.6 统计分析 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 耐药株的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 交叉耐药和遗传稳定实验 | 第27页 |
| 2.3.3 诱导前后菌株生物学特性比较 | 第27-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 3 诱导耐药株的靶位点突变及主动外排系统检测 | 第31-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器及设备 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 靶基因QRDRs突变位点的检测 | 第31-33页 |
| 3.2.2 多重外排泵抑制剂对受试菌MIC的影响 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-36页 |
| 3.3.1 染色体上喹诺酮耐药区突变位点的检测 | 第34-35页 |
| 3.3.2 多重外排泵抑制剂对受试菌MIC的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 4 哈维氏弧菌敏感菌和耐药菌转录组分析 | 第38-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.1 菌株 | 第38页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 RNA的提取和检测 | 第38页 |
| 4.2.2 RNA文库构建 | 第38-39页 |
| 4.2.3 文库质控及上机测序 | 第39页 |
| 4.2.4 生物信息学分析 | 第39页 |
| 4.2.5 基因表达量计算 | 第39页 |
| 4.2.6 基因功能注释 | 第39页 |
| 4.2.7 差异表达分析 | 第39-40页 |
| 4.2.8 差异表达基因功能注释和富集分析 | 第40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-50页 |
| 4.3.1 细菌RNA质量检测 | 第40-41页 |
| 4.3.2 原始测序数据分析 | 第41页 |
| 4.3.3 组装结果统计 | 第41-42页 |
| 4.3.4 基因功能注释及分类结果 | 第42页 |
| 4.3.5 差异表达基因分析 | 第42-43页 |
| 4.3.6 差异表达基因功能注释和富集分析 | 第43-49页 |
| 4.3.7 耐药相关基因分析 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 荧光定量验证差异表达基因 | 第53-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第53页 |
| 5.1.1 菌株 | 第53页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第53页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.2.1 细菌RNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.2 cDNA的合成 | 第53-54页 |
| 5.2.3 RT-PCR的引物设计 | 第54页 |
| 5.2.4 RT-PCR | 第54-55页 |
| 5.2.5 数据统计与分析 | 第55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-56页 |
| 5.3.1 总RNA的提取 | 第55页 |
| 5.3.2 cDNA的合成 | 第55-56页 |
| 5.3.3 荧光定量验证结果 | 第56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 6 哈维氏弧菌qnr基因的克隆和原核表达 | 第58-64页 |
| 6.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 6.1.1 菌株和载体 | 第58页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第58页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第58-59页 |
| 6.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 6.2.1 哈维氏弧菌菌株的活化及基因组DNA的提取 | 第59页 |
| 6.2.2 qnr基因的扩增 | 第59页 |
| 6.2.3 表达载体的构建 | 第59页 |
| 6.2.4 融合蛋白的诱导表达 | 第59页 |
| 6.2.5 原核表达条件优化 | 第59-60页 |
| 6.3 结果与分析 | 第60-62页 |
| 6.3.1 目的基因PCR扩增结果 | 第60页 |
| 6.3.2 原核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 6.3.3 融合蛋白的诱导表达 | 第61页 |
| 6.3.4 原核表达条件优化 | 第61-62页 |
| 6.4 讨论 | 第62-64页 |
| 7 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80页 |
