| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum, MG）简介 | 第13-17页 |
| 1.1.1 鸡毒支原体（ MG）病原学 | 第13页 |
| 1.1.2 鸡毒支原体（MG）的研究发展史 | 第13-14页 |
| 1.1.3 鸡毒支原体的流行病学 | 第14页 |
| 1.1.4 症状与临床变化 | 第14-15页 |
| 1.1.5 鸡毒支原体的诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.6 鸡毒支原体相关疾病的防控 | 第16-17页 |
| 1.2 鸡毒支原体的致病机理 | 第17-18页 |
| 1.3 鸡毒支原体膜相关蛋白及粘附因子的研究 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 p25、p33的序列分析及其原核表达 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要溶液及其配制 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 p25、p33基因序列的分析 | 第21页 |
| 2.2.2 MG S6菌株的培养及其基因组的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 p25、p33基因的定点突变及其克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.4 MG S6 cDNA的制备以及P25、P33表达性的检测 | 第23页 |
| 2.2.5 pET-32a-p25、pET-28a-p33重组质粒的构建与酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.6 pET-32a-p25、pET-28a-p33重组质粒的转化及表达 | 第24-25页 |
| 2.2.7 rP25、rP33诱导条件的优化 | 第25页 |
| 2.2.8 rP25、rP33可溶性的判断 | 第25页 |
| 2.2.9 rP25、rP33的纯化 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 p25、p33基因序列的分析 | 第25-27页 |
| 2.3.2 p25、p33基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.3 pET-32a-p25、pET-28a-p33重组质粒的构建与酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 小结 | 第29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 P25、P33多克隆抗体的制备及其亚细胞定位 | 第31-37页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 血清与菌株 | 第31页 |
| 3.1.3 实验设备与主要耗材 | 第31页 |
| 3.1.4 相关溶液的配制 | 第31-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 兔抗 r P25/r P33 多抗的制备 | 第32页 |
| 3.2.2 兔抗rP25/rP33抗体效价的测定 | 第32页 |
| 3.2.3 利用辛酸-硫酸铵盐析法纯化兔抗rP25/rP33抗体 | 第32-33页 |
| 3.2.4 利用rP25/rP33抗血清来鉴别MG S6与MS | 第33页 |
| 3.2.5 MG S6的总蛋白、胞膜蛋白以及胞浆蛋白的提取 | 第33-34页 |
| 3.2.6 P25/P33在MG S6中的亚细胞定位 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-36页 |
| 3.3.1 兔抗rP25/rP33高免血清抗体效价的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.2 利用rP25/rP33抗血清来鉴别MG S6与MS | 第35页 |
| 3.3.3 P25/P33在MG S6中的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 3.4 小结 | 第36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 P25、P33粘附特性的研究 | 第37-48页 |
| 4.1 材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 细胞与菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 血清 | 第37页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第37-38页 |
| 4.2 方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 激光共聚焦扫描显微镜观察MG S6及rP25/rP33粘附DF-1 细胞264.2.2 夹心ELISA实验 | 第38页 |
| 4.2.2 夹心 ELISA 实验 | 第38-40页 |
| 4.2.3 流式细胞仪检测MG对DF-1 细胞的粘附以及兔抗rP25/rP33血清单独以及联合作用对该粘附的抑制 | 第40页 |
| 4.2.4 透射电镜观察MG对DF-1 细胞的粘附以及兔抗rP25/rP33血清对该粘附的抑制 | 第40页 |
| 4.3 结果 | 第40-46页 |
| 4.3.1 激光共聚焦显微镜观察MG S6及rP25/rP33粘附DF-1 细胞以及抗rP25/rP33血清分别对MG S6、rP25、rP33粘附DF-1 细胞的抑制 | 第40-42页 |
| 4.3.2 夹心 ELISA 实验 | 第42-45页 |
| 4.3.3 流式细胞仪检测MG对DF-1 细胞的粘附以及兔抗rP25/rP33血清单独作用以及联合作用对该粘附的抑制 | 第45页 |
| 4.3.4 透射电镜观察MG对DF-1 细胞的粘附与兔抗rP25/rP33血清单独作用以及抗血清联合作用对该粘附的抑制 | 第45-46页 |
| 4.4 小结 | 第46页 |
| 4.5 讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 rP25/rP33诱导DF-1 细胞细胞因子分泌水平的研究 | 第48-56页 |
| 5.1 材料 | 第48页 |
| 5.1.1 细胞 | 第48页 |
| 5.1.2 设备 | 第48页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 5.2 方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 rP25/rP33刺激DF-1 细胞 | 第48页 |
| 5.2.2 SYBR Green I Real-Time PCR检测细胞因子的表达情况 | 第48-49页 |
| 5.2.3 ELISA方法检测rP25/rP33诱导DF-1 细胞IL-1β/2 及IFN-γ的释放量 | 第49-50页 |
| 5.3 结果 | 第50-54页 |
| 5.3.1 鸡GAPDH、IL-1β/2/4/10和IFN-γ的SYBR Green I Realtime PCR引物特异性的研究 | 第50页 |
| 5.3.2 rP25刺激DF-1 细胞IL-1β/2/4/10和IFN-γ的mRNA上调表达 | 第50-51页 |
| 5.3.3 rP33刺激DF-1 细胞IL-1β/2/4/10和IFN-γ的mRNA上调表达 | 第51-52页 |
| 5.3.4 ELISA检测rP25诱导DF-1 细胞IL-1β/2 和IFN-γ的释放量 | 第52-53页 |
| 5.3.5 ELISA检测rP33诱导DF-1 细胞IL-1β/2 和IFN-γ的释放量 | 第53-54页 |
| 5.4 小结 | 第54页 |
| 5.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
| 发表论文 | 第64页 |
