摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-11页 |
缩略词表(Abbreviations) | 第12-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-30页 |
1.1 引言 | 第13页 |
1.2 骨骼肌的发育 | 第13-19页 |
1.2.1 骨骼肌的来源 | 第13-14页 |
1.2.2 骨骼肌的形成 | 第14-15页 |
1.2.3 骨骼肌形成过程中相关调控因子 | 第15-17页 |
1.2.4 调节骨骼肌形成的信号通路 | 第17-19页 |
1.3 microRNA概述 | 第19-25页 |
1.3.1 microRNA的生物合成及作用机制 | 第20页 |
1.3.2 microRNA的检测方法 | 第20-22页 |
1.3.3 microRNA靶基因的预测及鉴定 | 第22-25页 |
1.4 microRNA调控骨骼肌的发育 | 第25-29页 |
1.4.1 骨骼肌中高表达的microRNA | 第25-27页 |
1.4.2 microRNA与成肌细胞的增殖和分化 | 第27-28页 |
1.4.3 miRNA调节肌纤维类型的转变 | 第28页 |
1.4.4 microRNA与生肌调节因子和生肌增强因子 | 第28-29页 |
1.5 本研究的目的意义 | 第29-30页 |
第二章 材料和方法 | 第30-48页 |
2.1 材料 | 第30-33页 |
2.1.1 实验材料 | 第30页 |
2.1.2 主要仪器设备 | 第30-31页 |
2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第31-32页 |
2.1.4 常用试剂及其配置 | 第32-33页 |
2.2 方法 | 第33-48页 |
2.2.1 细胞培养 | 第33-35页 |
2.2.2 总RNA提取 | 第35页 |
2.2.3 miRNA的定量分析 | 第35-37页 |
2.2.4 基因的定量分析 | 第37-38页 |
2.2.5 双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建 | 第38-44页 |
2.2.6 Western blotting分析 | 第44-46页 |
2.2.7 免疫荧光 | 第46页 |
2.2.8 细胞增殖实验 | 第46-47页 |
2.2.9 生物信息学分析数据库及软件 | 第47页 |
2.2.10 统计分析 | 第47-48页 |
第三章 结果与分析 | 第48-66页 |
3.1 调控Myf6基因的microRNA鉴定 | 第48-52页 |
3.1.1 靶定Myf63’UTR的microRNA预测 | 第48页 |
3.1.2 构建Myf6基因 3’UTR双荧光素酶报告载体 | 第48-49页 |
3.1.3 双荧光素酶报告实验 | 第49-51页 |
3.1.4 miR-374b调控内源Myf6表达 | 第51-52页 |
3.2 miR-374b调节骨骼肌发育 | 第52-62页 |
3.2.1 miR-374b的序列保守性分析 | 第52页 |
3.2.2 miR-374b组织表达谱分析 | 第52-53页 |
3.2.3 细胞表达分析 | 第53-55页 |
3.2.4 miR-374b抑制成肌细胞分化 | 第55-59页 |
3.2.5 miR-374b对肌纤维类型的影响 | 第59-61页 |
3.2.6 miR-374b对C2C12细胞增殖的影响 | 第61-62页 |
3.3 miR-299调节骨骼肌发育 | 第62-66页 |
3.3.1 miR-299序列保守性分析 | 第62页 |
3.3.2 miR-299在不同组织中的表达分析 | 第62-63页 |
3.3.3 miR-299在C2C12细胞分化过程中的表达分析 | 第63-64页 |
3.3.4 miR-299抑制成肌细胞分化 | 第64-66页 |
第四章 讨论 | 第66-71页 |
4.1 鉴定调控Myf6基因的microRNA | 第66-67页 |
4.2 microRNA的保守性分析 | 第67-68页 |
4.3 miR-374b和miR-299的表达谱分析 | 第68页 |
4.4 miR-374b对C2C12成肌细胞增殖与分化的影响 | 第68-69页 |
4.5 miR-374b抑制慢肌纤维的形成 | 第69页 |
4.6 miR-299正向调控C2C12成肌细胞分化 | 第69-71页 |
第五章 结论 | 第71-73页 |
5.1 本研究的主要成果 | 第71页 |
5.2 本研究的主要创新点 | 第71页 |
5.3 本研究不足之处 | 第71-72页 |
5.4 下一步工作计划 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-86页 |
研究生在读期间发表的主要论文 | 第86-87页 |
致谢 | 第87-88页 |