| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 斑马鱼简介 | 第13-15页 |
| 2 鱼类的免疫系统 | 第15-23页 |
| 2.1 免疫系统的个体发生 | 第15-16页 |
| 2.2 淋巴器官 | 第16-17页 |
| 2.2.1 胸腺 | 第16页 |
| 2.2.2 肾脏 | 第16-17页 |
| 2.2.3 脾 | 第17页 |
| 2.3 参与免疫反应的细胞 | 第17页 |
| 2.4 鱼类的非特异性免疫 | 第17-22页 |
| 2.4.1 物理屏障 | 第17-18页 |
| 2.4.2 非特异性细胞的细胞毒性 | 第18页 |
| 2.4.3 抗菌肽 | 第18页 |
| 2.4.4 吞噬作用 | 第18页 |
| 2.4.5 补体 | 第18-19页 |
| 2.4.6 肿瘤坏死因子(TNF) | 第19页 |
| 2.4.7 干扰素(INF) | 第19-20页 |
| 2.4.8 白介素(IL) | 第20页 |
| 2.4.9 其它的细胞因子和趋化因子 | 第20页 |
| 2.4.10 蛋白激酶抑制剂 | 第20页 |
| 2.4.11 溶菌酶 | 第20-21页 |
| 2.4.12 天然抗体 | 第21页 |
| 2.4.13 正五聚蛋白 | 第21页 |
| 2.4.14 转铁蛋白 | 第21-22页 |
| 2.5 鱼类的特异性免疫 | 第22-23页 |
| 2.5.1 抗体 | 第22页 |
| 2.5.2 免疫记忆 | 第22-23页 |
| 2.5.3 细胞的细胞毒性 | 第23页 |
| 2.5.4 适应性免疫中的细胞因子 | 第23页 |
| 3 先天性免疫 | 第23-29页 |
| 3.1 先天性免疫系统的非自我识别 | 第23-26页 |
| 3.2 先天性免疫与疾病 | 第26-28页 |
| 3.3 母源性免疫与鱼类 | 第28-29页 |
| 4 高通量分离技术 | 第29-30页 |
| 5 锌指蛋白研究概况 | 第30-31页 |
| 5.1 锌指结构 | 第30-31页 |
| 5.2 锌指蛋白 | 第31页 |
| 6 ZRANB2的研究概况 | 第31-32页 |
| 7 本文的研究目的和技术路线 | 第32-33页 |
| 7.1 研究目的 | 第32页 |
| 7.2 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 斑马鱼母源性免疫因子的高通量分离与鉴定 | 第33-95页 |
| 1 前言 | 第33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第34-36页 |
| 2.2 从斑马鱼胚胎提取液中高通量分离母源性免疫因子 | 第36-40页 |
| 2.2.1 斑马鱼卵液的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.2 制备交联有LPS的琼脂糖凝胶柱 | 第37页 |
| 2.2.3 上样与洗脱 | 第37-38页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE检测 | 第38-39页 |
| 2.2.5 质谱鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3 Western blotting检测目的蛋白在不同组织和不同发育时期的存在情况 | 第40-41页 |
| 2.3.1 斑马鱼各组织和不同发育时期匀浆液的获得 | 第40页 |
| 2.3.2 Western blotting检测 | 第40-41页 |
| 2.4 斑马鱼zranb2基因序列的获得 | 第41-47页 |
| 2.4.1 斑马鱼胚胎总RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.4.2 斑马鱼胚胎总cDNA的获得 | 第42-45页 |
| 2.4.3 斑马鱼zranb2基因的克隆 | 第45-47页 |
| 2.5 斑马鱼zranb2的序列分析、进化分析和基因组织结构分析 | 第47-48页 |
| 2.6 Real-time PCR技术检测斑马鱼zranb2的表达情况 | 第48-50页 |
| 2.6.1 Real-time PCR所用实验材料的获得 | 第48页 |
| 2.6.2 RNA的提取、cDNA模板的合成与检测 | 第48页 |
| 2.6.3 设计Real-time PCR特异性引物 | 第48-49页 |
| 2.6.4 Real-time PCR扩增 | 第49-50页 |
| 2.7 原位杂交技术检测斑马鱼zranb2的表达情况 | 第50-53页 |
| 2.7.1 合成探针 | 第50页 |
| 2.7.2 原位杂交技术 | 第50-53页 |
| 2.8 斑马鱼ZRANB2重组蛋白的体外表达 | 第53-57页 |
| 2.8.1 斑马鱼ZRANB2体外表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 2.8.2 斑马鱼rZRANB2的体外表达 | 第54-55页 |
| 2.8.3 斑马鱼rZRANB2的纯化 | 第55-56页 |
| 2.8.4 斑马鱼rZRANB2的浓缩 | 第56-57页 |
| 2.9 斑马鱼rZRANB2与LPS结合能力的鉴定 | 第57-58页 |
| 2.9.1 用NHS-LC-biotin标记rZRANB2和BSA | 第57页 |
| 2.9.2 ELISA技术检测rZRANB2与LPS的结合情况 | 第57-58页 |
| 2.9.3 ELISA技术检测rZRANB2与脂质A的结合情况 | 第58页 |
| 2.9.4 ELISA技术检测rZRANB2与单糖的结合情况 | 第58页 |
| 2.10 斑马鱼rZRANB2与细菌结合能力的鉴定 | 第58-59页 |
| 2.10.1 大肠杆菌、鳗弧球菌和嗜水气单胞菌的培养 | 第58-59页 |
| 2.10.2 Western bloting技术分析重组蛋白与细菌的结合情况 | 第59页 |
| 2.10.3 用异硫氰酸荧光素(FITC)标记法分析rZRANB2与细菌的结合能力 | 第59页 |
| 2.11 斑马鱼rZRANB2的抗菌活性的验证 | 第59-60页 |
| 2.11.1 大肠杆菌、鳗弧球菌和嗜水气单胞菌的培养 | 第59页 |
| 2.11.2 斑马鱼rZRANB2对大肠杆菌和鳗弧球菌的抗菌活性的验证 | 第59-60页 |
| 2.11.3 斑马鱼rZRANB2对嗜水气单胞菌的抗菌活性的验证 | 第60页 |
| 2.12 斑马鱼rZRANB2流式细胞术检测 | 第60-61页 |
| 2.13 斑马鱼胚胎中ZRANB2的抗菌活性的验证 | 第61-62页 |
| 2.13.1 检测斑马鱼胚胎提取液中ZRANB2的抗菌活性 | 第61页 |
| 2.13.2 检测斑马鱼体内ZRANB2是否有胚胎防御作用 | 第61-62页 |
| 2.14 斑马鱼胚胎中ZRANB2的浓度测定 | 第62页 |
| 2.15 斑马鱼ZRANB2活性中心的探寻 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-92页 |
| 3.1 从斑马鱼胚胎提取液中高通量分离母源性免疫因子 | 第63-65页 |
| 3.1.1 高通量分离斑马鱼母源性免疫因子的质谱结果 | 第63-64页 |
| 3.1.2 Western blotting检测斑马鱼ZRANB2在不同组织中的分布情况 | 第64-65页 |
| 3.1.3 Western blotting检测斑马鱼ZRANB2在不同时期胚胎中的表达情况 | 第65页 |
| 3.2 斑马鱼zranb2基因的序列分析、结构分析、进化分析和共线性分析 | 第65-72页 |
| 3.2.1 斑马鱼zranb2基因序列的获得 | 第65-66页 |
| 3.2.2 斑马鱼zranb2基因的序列分析 | 第66-70页 |
| 3.2.3 斑马鱼ZRANB2结构分析 | 第70-71页 |
| 3.2.4 斑马鱼ZRANB2进化分析 | 第71页 |
| 3.2.5 斑马鱼zranb2基因的共线性分析 | 第71-72页 |
| 3.3 斑马鱼zranb2在不同组织和不同时期的表达模式 | 第72-78页 |
| 3.3.1 qRT-PCR检测的斑马鱼zranb2在不同组织中的表达模式 | 第72-74页 |
| 3.3.2 qRT-PCR检测的斑马鱼zranb2在不同时期的表达模式 | 第74-76页 |
| 3.3.3 WISH检测的斑马鱼zranb2在不同组织中的表达模式 | 第76-78页 |
| 3.4 斑马鱼rZRANB2的体外重组表达 | 第78-80页 |
| 3.4.1 pET-28a/zranb2表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 3.4.2 斑马鱼rZRANB2的体外表达和纯化 | 第79-80页 |
| 3.4.3 斑马鱼rZRANB2的Western blotting鉴定 | 第80页 |
| 3.5 斑马鱼rZRANB2与LPS结合情况的验证 | 第80-81页 |
| 3.6 斑马鱼rZRANB2与细菌结合情况的验证 | 第81-83页 |
| 3.6.1 Western blotting检测结果 | 第81-82页 |
| 3.6.2 FITC标记法的检测结果 | 第82-83页 |
| 3.7 斑马鱼rZRANB2体外抗菌活性的验证 | 第83页 |
| 3.8 斑马鱼rZRANB2流式细胞术检测 | 第83-84页 |
| 3.9 斑马鱼早期胚胎中ZRANB2的免疫防护作用的验证 | 第84-87页 |
| 3.9.1 斑马鱼早期胚胎提取液中ZRANB2抗菌活性的验证 | 第84-85页 |
| 3.9.2 斑马鱼早期胚胎中ZRANB2抗菌活性的验证 | 第85-87页 |
| 3.10 斑马鱼早期胚胎中ZRANB2浓度的确定 | 第87-89页 |
| 3.11 斑马鱼ZRANB2截短后多肽的抗菌活性的验证 | 第89-92页 |
| 3.11.1 斑马鱼ZRANB2截短示意图 | 第89页 |
| 3.11.2 Z_(38/198)、Z_(1/37)和Z_(11/37)体外抗菌活性以及与LPS结合能力的验证 | 第89-92页 |
| 3.11.3 Z_(38/198)、Z_(1/37)和Z_(11/37)体内抗菌活性的验证 | 第92页 |
| 4 讨论 | 第92-95页 |
| 总结与展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 个人简历 | 第110页 |
| 发表的文章 | 第110页 |
