| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1. 甘氨酸脱羧酶研究概况 | 第17-22页 |
| 1.1 甘氨酸脱羧酶复合体 | 第17-18页 |
| 1.2 甘氨酸脱羧酶催化的生化反应 | 第18-19页 |
| 1.3 甘氨酸脱羧酶复合体蛋白亚基的编码基因 | 第19-20页 |
| 1.4 甘氨酸脱羧酶的生物学功能 | 第20-22页 |
| 2. 光呼吸 | 第22-31页 |
| 2.1 光呼吸代谢途径 | 第22-24页 |
| 2.2 C4植物的光呼吸 | 第24-25页 |
| 2.3 乙醛酸代谢旁路 | 第25-26页 |
| 2.4 光呼吸的生物学功能 | 第26-29页 |
| 2.5 光呼吸缺陷表型 | 第29-31页 |
| 2.5.1 光呼吸缺陷表型 | 第29-30页 |
| 2.5.2 光呼吸缺陷突变体的筛选 | 第30页 |
| 2.5.3 光呼吸基因的表达 | 第30-31页 |
| 3. 植物衰老的研究概况 | 第31-40页 |
| 3.1 植物衰老 | 第31-32页 |
| 3.1.1 植物衰老的概述 | 第31-32页 |
| 3.1.2 植物的衰老,超敏反应和细胞程序性死亡 | 第32页 |
| 3.2 植物衰老的特征 | 第32-35页 |
| 3.2.1 植物衰老的生理学特征 | 第32-33页 |
| 3.2.2 植物衰老的细胞学特征 | 第33-34页 |
| 3.2.3 植物衰老的分子生物学特征 | 第34-35页 |
| 3.3 植物衰老的调节因素和调控机制 | 第35-40页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第40-43页 |
| 第二章 OsGDCH基因为一典型的光呼吸基因 | 第43-90页 |
| 1. 引言 | 第43-44页 |
| 2. 材料与方法 | 第44-68页 |
| 2.1 植物材料及其培养 | 第44-45页 |
| 2.2 水稻总RNA的提取 | 第45-47页 |
| 2.3 cDNA第一链的合成 | 第47页 |
| 2.4 甘氨酸脱羧酶H亚基的载体构建 | 第47-53页 |
| 2.4.1 OsGDCH基因超量表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 2.4.2 OsGDCH基因抑制表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 2.4.3 载体质粒转入农杆菌EHA105 | 第52-53页 |
| 2.5 农杆菌介导的水稻愈伤组织的遗传转化 | 第53-54页 |
| 2.6 转基因植株的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 2.7 转基因植株的Southern blot分析 | 第55-58页 |
| 2.8 转基因植株的Northern blot分析 | 第58-60页 |
| 2.9 荧光定量PCR分析 | 第60-61页 |
| 2.9.1 荧光定量PCR的引物设计 | 第60-61页 |
| 2.9.2 荧光定量PCR的运行和数据分析 | 第61页 |
| 2.10 原核表达 | 第61-66页 |
| 2.10.1 原核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.10.2 融合蛋白的获取 | 第62-64页 |
| 2.10.3 多克隆抗体的制备和效价测定 | 第64-65页 |
| 2.10.4 Western blot分析 | 第65-66页 |
| 2.11 氨基酸含量的测定 | 第66-68页 |
| 2.11.1 水稻叶片中氨基酸的提取 | 第66页 |
| 2.11.2 氨基酸含量的测定和数据分析 | 第66-68页 |
| 2.12 标准苗期集团法进行抗褐飞虱鉴定 | 第68页 |
| 3. 结果与分析 | 第68-86页 |
| 3.1 转基因载体的构建 | 第68-71页 |
| 3.1.1 OsGDCH基因超量表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 3.1.2 OsGDCH基因抑制表达载体的构建 | 第69-71页 |
| 3.2 原核表达 | 第71-73页 |
| 3.2.1 OxGDCH原核表达载体的构建 | 第71页 |
| 3.2.2 OsGDCH-his融合蛋白的诱导,纯化和质谱鉴定 | 第71-72页 |
| 3.2.3 多克隆抗体的制备和效价测定 | 第72-73页 |
| 3.3 转基因水稻材料的获得 | 第73页 |
| 3.4 转基因水稻材料的分子鉴定 | 第73-77页 |
| 3.4.1 OsGDCH超量表达植株的分子鉴定 | 第73-75页 |
| 3.4.2 OxGDCH抑制表达植株的分子鉴定 | 第75-77页 |
| 3.5 转基因水稻材料的表型鉴定 | 第77-83页 |
| 3.5.1 OsGDCH超量表达植株的表型鉴定 | 第77页 |
| 3.5.2 OsGDCH抑制表达植株的表型鉴定 | 第77-79页 |
| 3.5.3 OsGDCH抑制表达植株中光呼吸代谢相关氨基酸的含量测定 | 第79-83页 |
| 3.6 甘氨酸脱羧酶复合体中其他蛋白亚基在OsGDCH抑制植株中的表达分析 | 第83-84页 |
| 3.7 OsGDCH-RNAi植株中OsGDCH同源基因的表达 | 第84-85页 |
| 3.8 水稻中OsGDCH及其同源基因的组织表达模式分析 | 第85-86页 |
| 4. 讨论 | 第86-90页 |
| 第三章 OsGDCH抑制转基因植株在大气环境中表现为早衰的表型 | 第90-111页 |
| 1. 引言 | 第90-91页 |
| 2. 材料和方法 | 第91-97页 |
| 2.1 材料及其培养 | 第91页 |
| 2.2 叶绿素含量的测定 | 第91页 |
| 2.3 蓝绿温和胶电泳 | 第91-93页 |
| 2.3.1 内囊体蛋白的体取 | 第91页 |
| 2.3.2 蓝绿温和胶电泳 | 第91-93页 |
| 2.4 光合作用的测定 | 第93页 |
| 2.5 蔗糖含量的测定 | 第93-94页 |
| 2.6 蛋白质含量的测定 | 第94页 |
| 2.7 透射电子显微镜的观察 | 第94页 |
| 2.8 荧光定量PCR(qPCR)和半定量PCR(RT-PCR) | 第94-97页 |
| 2.8.1 荧光定量PCR(qPCR) | 第94-95页 |
| 2.8.2 半定量PCR(RT-PCR) | 第95-97页 |
| 3. 结果与分析 | 第97-109页 |
| 3.1 叶绿素含量的测定 | 第97-99页 |
| 3.2 蛋白质含量的测定 | 第99页 |
| 3.3 光合作用的测定 | 第99页 |
| 3.4 叶绿素复合体的检测 | 第99-101页 |
| 3.5 蔗糖含量的测定 | 第101-102页 |
| 3.6 叶绿体结构的显微观察 | 第102-105页 |
| 3.7 自噬体相关基因的表达分析 | 第105-107页 |
| 3.8 衰老下调基因SDGs以及衰老相关基因SAGs的表达分析 | 第107-109页 |
| 4. 讨论 | 第109-111页 |
| 第四章 活性氧诱导了OsGDCH抑制转基因植株的衰老表型 | 第111-128页 |
| 1. 引言 | 第111-112页 |
| 2. 材料和方法 | 第112-116页 |
| 2.1 材料及其培养 | 第112页 |
| 2.2 组织化学实验 | 第112-113页 |
| 2.2.1 活性氧检测 | 第112-113页 |
| 2.2.2 死细胞检测 | 第113页 |
| 2.3 酶活测定实验 | 第113-115页 |
| 2.4 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第115-116页 |
| 2.5 RNA的提取,cDNA第一链的合成,RT-PCR和qPCR分析 | 第116页 |
| 3. 结果与分析 | 第116-125页 |
| 3.1 活性氧的检测以及抗氧化酶酶活的测定 | 第116-119页 |
| 3.2 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第119-120页 |
| 3.3 过氧化氢处理后衰老下调基因SDGs和衰老相关基因SAGs的表达模式分析 | 第120-122页 |
| 3.4 过氧化氢处理后自噬基因的表达模式分析 | 第122-123页 |
| 3.5 过氧化氢处理后衰老相关转录因子的表达模式分析 | 第123-125页 |
| 4. 讨论 | 第125-128页 |
| 第五章 总讨论 | 第128-136页 |
| 参考文献 | 第136-161页 |
| 附录Ⅰ 水稻组织培养培养基 | 第161-163页 |
| 致谢 | 第163页 |
