| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 植物病原细菌简介 | 第14-16页 |
| 1.1.1 植物病原细菌的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 十字花科黑腐病菌 | 第15-16页 |
| 1.1.3 十字花科黑腐病菌Xcc 8004 | 第16页 |
| 1.2 关于植物病原细菌致病的分子机理 | 第16-19页 |
| 1.2.1 植物与植物病原细菌的协同进化 | 第17页 |
| 1.2.2 植物病原细菌的致病因子简介 | 第17-19页 |
| 1.3 Ⅲ型分泌系统和Ⅲ型效应物 | 第19-21页 |
| 1.3.1 Ⅲ型分泌系统 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Ⅲ型效应物 | 第20页 |
| 1.3.3 Xcc 8004中已鉴定的T3SEs | 第20-21页 |
| 1.4 无毒基因 | 第21-24页 |
| 1.4.1 基因-基因学说 | 第21页 |
| 1.4.2 无毒基因 | 第21-22页 |
| 1.4.3 无毒基因与R基因的互作模式 | 第22-23页 |
| 1.4.4 无毒基因的研究现状 | 第23页 |
| 1.4.5 Xcc 8004中已鉴定的无毒基因 | 第23-24页 |
| 1.5 无毒基因的检测方法 | 第24页 |
| 1.5.1 农杆菌介导法检测无毒基因 | 第24页 |
| 1.5.2 构建缺失突变体检测无毒基因 | 第24页 |
| 1.6 抗性品种 | 第24-26页 |
| 1.6.1 抗性品种的鉴定方法 | 第25页 |
| 1.6.2 本实验室已鉴定的抗性植株品种 | 第25页 |
| 1.6.3 抗病机制 | 第25-26页 |
| 1.6.4 植物的R基因研究进展 | 第26页 |
| 1.7 研究内容与意义 | 第26-28页 |
| 1.7.1 我的工作 | 第26页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-38页 |
| 2.1.1 实验过程涉及的菌株和质粒 | 第28-35页 |
| 2.1.2 培养基的选择 | 第35页 |
| 2.1.3 选用抗生素 | 第35-36页 |
| 2.1.4 实验常用的各种溶液和缓冲液 | 第36-38页 |
| 2.1.5 其他实验材料 | 第38页 |
| 2.2 具体实验方法 | 第38-58页 |
| 2.2.1 不同菌株的培养及保存 | 第38-39页 |
| 2.2.2 细菌总DNA的提取 | 第39页 |
| 2.2.3 细菌质粒的提取(碱裂解法) | 第39-40页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.2.5 引物设计方法 | 第41-46页 |
| 2.2.6 用PCR扩增目的DNA片段 | 第46-47页 |
| 2.2.7 PCR反应过程 | 第47-48页 |
| 2.2.7.1 以菌体为模板的PCR | 第47页 |
| 2.2.7.2 以DNA为模板的PCR | 第47-48页 |
| 2.2.8 DNA的纯化和回收 | 第48页 |
| 2.2.9 DNA的酶切 | 第48页 |
| 2.2.10 DNA的连接 | 第48-49页 |
| 2.2.11 电脉冲感受态细胞的制备和转化 | 第49页 |
| 2.2.12 化学法感受态细胞的制备和转化 | 第49-50页 |
| 2.2.13 DNA序列的测定 | 第50-51页 |
| 2.2.14 三亲本接合 | 第51-52页 |
| 2.2.15 植株试验 | 第52-55页 |
| 2.2.15.1 致病性试验 | 第52-53页 |
| 2.2.15.2 过敏反应试验 | 第53-54页 |
| 2.2.15.3 细菌在寄主中的生长与繁殖 | 第54页 |
| 2.2.15.4 农杆菌瞬时表达 | 第54-55页 |
| 2.2.16 缺失突变体的构建 | 第55页 |
| 2.2.17 突变体的反式功能互补 | 第55页 |
| 2.2.18 胞外多糖的检测 | 第55-56页 |
| 2.2.19 胞外酶的检测 | 第56-57页 |
| 2.2.19.1 胞外淀粉酶的检测 | 第56页 |
| 2.2.19.2 胞外纤维素酶的检测 | 第56页 |
| 2.2.19.3 胞外蛋白酶的检测 | 第56-57页 |
| 2.2.20 细胞的游动性检测 | 第57-58页 |
| 第三章 实验过程与结果分析 | 第58-95页 |
| 3.1 缺失突变体的构建 | 第58-76页 |
| 3.1.1 缺失突变体构建的技术路线 | 第58-61页 |
| 3.1.1.1 引物设计方案 | 第59页 |
| 3.1.1.2 关于载体pK18mobsacB | 第59-60页 |
| 3.1.1.3 缺失突变原理及突变体的筛选 | 第60-61页 |
| 3.1.2 17个效应物基因单缺失突变体的构建 | 第61-70页 |
| 3.1.2.1 XC0052缺失突变体的构建 | 第61-62页 |
| 3.1.2.2 其余16个效应物基因单缺失突变体的构建 | 第62-70页 |
| 3.1.3 多基因缺失突变体的构建 | 第70-76页 |
| 3.1.3.1 双基因缺失突变体的构建 | 第70-71页 |
| 3.1.3.2 三至十基因缺失突变体的构建 | 第71-72页 |
| 3.1.3.3 十二至十六基因缺失突变体的构建 | 第72-74页 |
| 3.1.3.4 十六基因缺失突变体的表型检测 | 第74-75页 |
| 3.1.3.5 十七基因缺失突变体的构建 | 第75-76页 |
| 3.1.4 小结缺失突变体的构建 | 第76页 |
| 3.2 十七基因缺失突变体部分反式功能互补菌株的构建 | 第76-78页 |
| 3.2.1 互补菌株构建的技术路线 | 第76-77页 |
| 3.2.2 16个单基因互补菌株的构建 | 第77-78页 |
| 3.3 农杆菌的构建 | 第78-81页 |
| 3.3.1 技术路线 | 第79页 |
| 3.3.2 关于载体pBI121 | 第79页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建 | 第79-80页 |
| 3.3.4 将重组质粒导入农杆菌 | 第80-81页 |
| 3.4 抗性品种的鉴定 | 第81-82页 |
| 3.4.1 抗性植株品种的鉴定方法 | 第81页 |
| 3.4.2 鉴定出抗性品种萝卜3号 | 第81-82页 |
| 3.5 植株试验 | 第82-95页 |
| 3.5.1 17个单基因缺失突变体在抗性品种萝卜3号上的致病性试验 | 第82-84页 |
| 3.5.2 十六、十七基因缺失突变体在抗性品种萝卜3号上检测无毒基因 | 第84-85页 |
| 3.5.3 十六、十七基因缺失突变体在不同十字花科植物上的致病性试验 | 第85-86页 |
| 3.5.4 十六、十七基因缺失突变体和17个单基因缺失突变体在满身萝卜上的致病性试验 | 第86-87页 |
| 3.5.5 十六、十七基因缺失突变体在萝卜3号的叶内生长状况 | 第87-88页 |
| 3.5.6 十六、十七基因缺失突变体在萝卜3号及其他植株品种上的过敏反应试验 | 第88-90页 |
| 3.5.7 16个△17+X互补菌株在满身红萝卜上的致病性试验 | 第90-91页 |
| 3.5.8 农杆菌介导法在抗性品种萝卜3号上检测无毒基因 | 第91-92页 |
| 3.5.9 Xcc 8004、33913和20个中国菌株和在萝卜3号上的致病性试验 | 第92-95页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第95-103页 |
| 4.1 关于缺失突变体的构建 | 第95-97页 |
| 4.2 关于效应物基因对致病性影响的研究 | 第97-99页 |
| 4.3 关于植物的抗性 | 第99-102页 |
| 4.4 关于无毒基因的检测方法 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第115页 |
