| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 怪柳抗逆研究概况 | 第15-17页 |
| 1.3 耐盐调控研究 | 第17-18页 |
| 1.4 植物抗重金属研究 | 第18-19页 |
| 1.5 植物启动子研究 | 第19-21页 |
| 1.6 V-ATPase的研究进展 | 第21-25页 |
| 1.6.1 V-ATPase的结构 | 第22页 |
| 1.6.2 V-ATPase的功能 | 第22-23页 |
| 1.6.3 V-ATPase c亚基的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第25-27页 |
| 2 盐胁迫及重金属胁迫对怪柳V-ATPase的影响 | 第27-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 常用试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 药品配置 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 怪柳cDNA准备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 Real time RT PCR反应体系和程序 | 第28页 |
| 2.2.3 V-ATPase相关活性的测定 | 第28-30页 |
| 2.2.4 其他相关生理指标的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 数据处理与分析 | 第31页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第31-42页 |
| 2.3.1 ThVHAc1蛋白表达及V ATPase相关活性的测定 | 第31-35页 |
| 2.3.2 相关生理指标 | 第35-38页 |
| 2.3.3 怪柳V-ATPase亚基的表达 | 第38-42页 |
| 2.4 本章讨论 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 3 ThVHac1因耐盐功能分析 | 第44-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第44页 |
| 3.1.3 相关药品配制及培养基制备 | 第44页 |
| 3.1.4 引物合成与重组载体测序 | 第44页 |
| 3.1.5 Na~+、K~+、H~+离子流速测定 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 植物过表达载体prokⅡ-ThVHAc1的构建 | 第45-47页 |
| 3.2.2 山新杨遗传转化 | 第47-49页 |
| 3.2.3 非损伤微测技术测定Na~+、K~+、H~+离子流速 | 第49页 |
| 3.2.4 转基因山新杨的耐盐功能分析 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-63页 |
| 3.3.1 植物过表达载体prokⅡ-ThVHAc1的构建 | 第50-51页 |
| 3.3.2 转基因山新杨的筛选与检测 | 第51页 |
| 3.3.3 转基因山新杨的表达分析 | 第51-52页 |
| 3.3.4 转基因山新杨在盐胁迫下的生长比较 | 第52-53页 |
| 3.3.5 转基因山新杨的ThVHAc1的蛋白表达 | 第53-54页 |
| 3.3.6 转基因山新杨的液泡膜ATPase活性分析 | 第54-55页 |
| 3.3.7 转基因山新杨盐胁迫下其他相关生理指标分析 | 第55-58页 |
| 3.3.8 转基因山新杨在盐胁迫下的组织化学染色分析 | 第58-60页 |
| 3.3.9 转基因山新杨盐胁迫下的离子转运分析 | 第60-63页 |
| 3.4 本章讨论 | 第63-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 4 ThVHAc1基因的抗镉功能分析 | 第66-89页 |
| 4.1 实验材料 | 第66页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第66页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第66页 |
| 4.1.3 药品及培养基制备 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-72页 |
| 4.2.1 拟南芥的培养与ThVHAc1遗传转化 | 第66-67页 |
| 4.2.2 T_0代的筛选与检测 | 第67页 |
| 4.2.3 转ThVHAc1拟南芥的表达分析 | 第67页 |
| 4.2.4 植物抑制表达载体RNAi::ThVHAc1的构建 | 第67-71页 |
| 4.2.5 转基因拟南芥V-ATPase相关活性分析 | 第71页 |
| 4.2.6 转基因拟南芥抗镉功能分析 | 第71页 |
| 4.2.7 瞬时过表达ThVHAc1的抗镉能力分析 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与分析 | 第72-86页 |
| 4.3.1 转基因拟南芥的筛选及分子检测 | 第72-73页 |
| 4.3.2 转基因拟南芥的表达分析 | 第73页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥在镉胁迫下的发芽及幼苗生长 | 第73-75页 |
| 4.3.4 镉胁迫处理下的转基因拟南芥生长情况 | 第75页 |
| 4.3.5 转基因拟南芥中ThVHAc1在镉胁迫下的蛋白表达 | 第75页 |
| 4.3.6 转基因拟南芥在镉胁迫下液泡膜微囊的相关分析 | 第75-77页 |
| 4.3.7 转基因拟南芥中ThVHAc1在镉胁迫下的组织化学染色分析 | 第77-78页 |
| 4.3.8 转基因拟南芥镉胁迫下其他生理指标分析 | 第78-82页 |
| 4.3.9 瞬时过表达ThVHAc1的抗镉能力分析 | 第82-86页 |
| 4.4 本章讨论 | 第86-88页 |
| 4.5 本章小结 | 第88-89页 |
| 5 过表达ThVHAc1基因对其他相关基因的影响 | 第89-100页 |
| 5.1 实验材料 | 第89页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第89页 |
| 5.2 实验方法 | 第89-90页 |
| 5.2.1 cDNA准备 | 第89页 |
| 5.2.2 过表达ThVHAc1对拟南芥V-ATPase其他亚基表达的影响 | 第89页 |
| 5.2.3 过表达ThVHAc1对其他基因的影响 | 第89页 |
| 5.2.4 瞬时过表达ThVHAc1对其柽柳其他相关基因表达的影响 | 第89-90页 |
| 5.3 结果与分析 | 第90-98页 |
| 5.3.1 过表达ThVHAc1对拟南芥中其他基因的影响 | 第90-96页 |
| 5.3.2 瞬时过表达ThVHAc1对柽柳其他基因的影响 | 第96-98页 |
| 5.4 本章讨论 | 第98-99页 |
| 5.5 本章小结 | 第99-100页 |
| 6 ThVHAc1基因的上游调控表达分析 | 第100-130页 |
| 6.1 实验材料 | 第100页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第100页 |
| 6.1.2 菌株与载体 | 第100页 |
| 6.1.3 常用培养基及药品配制 | 第100页 |
| 6.2 实验方法 | 第100-112页 |
| 6.2.1 ThVHAc1基因启动子的克隆 | 第100-103页 |
| 6.2.2 ThVHAc1基因启动子的时空表达模式分析 | 第103-105页 |
| 6.2.3 ThVHAc1基因上游调控因子研究 | 第105-110页 |
| 6.2.4 ThVHAc1上游调控基因与顺式作用元件的互作验证 | 第110-112页 |
| 6.2.5 ThVHAc1及其上游调控因子表达模式分析 | 第112页 |
| 6.3 结果与分析 | 第112-127页 |
| 6.3.1 ThVHAc1启动子获得 | 第112-114页 |
| 6.3.2 ThVHAc1 promoter的表达特性 | 第114-116页 |
| 6.3.3 ThVHAc1上游调控因子识别顺式作用元件的研究 | 第116-121页 |
| 6.3.4 ThVHAc1上游调控因子与特异识别元件的互作验证 | 第121-123页 |
| 6.3.5 ThVHAc1上游调控因子表达模式分析 | 第123-127页 |
| 6.4 本章讨论 | 第127-129页 |
| 6.5 本章小结 | 第129-130页 |
| 讨论 | 第130-133页 |
| 结论 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 附录 | 第145-149页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
