| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-43页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1.1 肝素的概述 | 第15-24页 |
| 1.1.1 肝素的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.1.2 肝素分类 | 第17-19页 |
| 1.1.2.1 普通(标准)肝素 | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 低分子量肝素 | 第18页 |
| 1.1.2.3 其它肝素 | 第18-19页 |
| 1.1.3 肝素的应用 | 第19-20页 |
| 1.1.4 肝素的理化性质 | 第20-21页 |
| 1.1.4.1 物理性质 | 第20页 |
| 1.1.4.2 化学性质 | 第20-21页 |
| 1.1.4.2.1 降解和水解反应 | 第20页 |
| 1.1.4.2.2 氧化反应 | 第20-21页 |
| 1.1.4.2.3 中和反应 | 第21页 |
| 1.1.4.2.4 酯化反应 | 第21页 |
| 1.1.5 肝素的抗凝机理 | 第21页 |
| 1.1.6 肝素类似物 | 第21-24页 |
| 1.1.6.1 硫酸皮肤素(DS) | 第21-22页 |
| 1.1.6.2 硫酸软骨素(CS) | 第22页 |
| 1.1.6.3 多硫酸软骨素(OSCS) | 第22-23页 |
| 1.1.6.3.1 多硫酸软骨素的性质与结构 | 第22-23页 |
| 1.1.6.3.2 多硫酸软骨素的制备 | 第23页 |
| 1.1.6.4 硫酸乙酰肝素(HS) | 第23-24页 |
| 1.2 肝素的制备工艺 | 第24-29页 |
| 1.2.1 肝素钠的制备技术 | 第24-27页 |
| 1.2.1.1 粗品的制备技术 | 第24-25页 |
| 1.2.1.2 精品的制备技术 | 第25-27页 |
| 1.2.1.2.1 高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法 | 第25-26页 |
| 1.2.1.2.2 过氧化氢分次加入的二次氧化法 | 第26页 |
| 1.2.1.2.3 酶解结合氧化法 | 第26-27页 |
| 1.2.2 低分子量肝素钠的制备技术 | 第27-29页 |
| 1.2.2.1 化学裂解法 | 第27-29页 |
| 1.2.2.1.1 亚硝酸降解法 | 第27页 |
| 1.2.2.1.2 过氧化氢降解法 | 第27-28页 |
| 1.2.2.1.3 β-消去降解法 | 第28页 |
| 1.2.2.1.4 其它化学降解法 | 第28页 |
| 1.2.2.1.5 化学降解法的优缺点 | 第28-29页 |
| 1.2.2.2 酶解法 | 第29页 |
| 1.3 肝素钠的质量研究 | 第29-38页 |
| 1.3.1 肝素钠原料药质量标准比较 | 第29页 |
| 1.3.2 关键检测方法 | 第29-38页 |
| 1.3.2.1 动物来源的鉴别 | 第29-31页 |
| 1.3.2.1.1 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第31页 |
| 1.3.2.1.2 ~(13)C-NMR/SAX-HPLC测定肝素钠的来源 | 第31页 |
| 1.3.2.1.3 PCR方法 | 第31页 |
| 1.3.2.2 病毒去除/灭活验证 | 第31-32页 |
| 1.3.2.2.1 病毒选用 | 第32页 |
| 1.3.2.2.2 病毒灭活与去除的方法 | 第32页 |
| 1.3.2.2.3 病毒滴度测定 | 第32页 |
| 1.3.2.2.4 灭活/去除病毒效果的判定 | 第32页 |
| 1.3.2.3 多硫酸软骨素和硫酸皮肤素的测定 | 第32-36页 |
| 1.3.2.3.1 核磁共振法(NMR) | 第33页 |
| 1.3.2.3.2 红外光谱法(IR) | 第33-34页 |
| 1.3.2.3.3 高效液相色谱法(HPLC) | 第34页 |
| 1.3.2.3.4 电化学法 | 第34页 |
| 1.3.2.3.5 荧光检测法 | 第34-35页 |
| 1.3.2.3.6 毛细管电泳法(CE) | 第35-36页 |
| 1.3.2.3.7 电泳法 | 第36页 |
| 1.3.2.4 效价测定 | 第36-38页 |
| 1.3.2.4.1 肝素生物测定法 | 第36-37页 |
| 1.3.2.4.2 生色底物法 | 第37页 |
| 1.3.2.4.3 天青A快速测定法 | 第37-38页 |
| 1.3.2.5 双糖组成的分析 | 第38页 |
| 1.4 肝素钠事件 | 第38-40页 |
| 1.4.1 肝素钠事件的冲击 | 第38-39页 |
| 1.4.2 肝素钠事件的产业影响 | 第39-40页 |
| 1.5 肝素钠质量标准的提高 | 第40页 |
| 1.6 课题的研究背景及意义 | 第40-41页 |
| 1.7 研究思路 | 第41-43页 |
| 第二章 阴离子交换HPLC法精确测定肝素钠中的多硫酸软骨素和硫酸皮肤素 | 第43-67页 |
| 2.1 引言 | 第43-44页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第44-46页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第44页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 2.2.2.1 肝素钠的离子交换HPLC分析方法 | 第44页 |
| 2.2.2.2 对照溶液的制备 | 第44页 |
| 2.2.2.3 供试溶液的制备 | 第44-46页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第46-65页 |
| 2.3.1 五种HPLC分析方法的供试溶液、进样体积和检测波长的确立 | 第46页 |
| 2.3.2 五种HPLC分析方法实验结果的比较 | 第46-49页 |
| 2.3.3 新HPLC方法E的方法学验证 | 第49-54页 |
| 2.3.3.1 洗脱梯度的确定 | 第49页 |
| 2.3.3.2 专属性 | 第49-50页 |
| 2.3.3.3 多硫酸软骨素和硫酸皮肤素的线性关系 | 第50-51页 |
| 2.3.3.4 系统适用性 | 第51页 |
| 2.3.3.5 多硫酸软骨素和硫酸皮肤素的检测限和定量限 | 第51-53页 |
| 2.3.3.6 精密度 | 第53页 |
| 2.3.3.7 回收率(准确度) | 第53-54页 |
| 2.3.3.8 耐用性 | 第54页 |
| 2.3.4 方法应用 | 第54-64页 |
| 2.3.4.1 肝素钠的测定 | 第54-59页 |
| 2.3.4.1.1 肝素钠粗品的测定 | 第54页 |
| 2.3.4.1.2 被OSCS污染的肝素钠粗品的测定 | 第54-55页 |
| 2.3.4.1.3 肝素钠原料药的测定 | 第55-56页 |
| 2.3.4.1.4 被多硫酸软骨素污染的肝素钠原料药的测定 | 第56-57页 |
| 2.3.4.1.5 肝素钠注射液的测定(辅料为氯化钠) | 第57页 |
| 2.3.4.1.6 被OSCS污染的肝素钠注射液的测定(辅料为氯化钠) | 第57-58页 |
| 2.3.4.1.7 肝素钠注射液的测定(辅料为苯酚) | 第58-59页 |
| 2.3.4.1.8 被OSCS污染的肝素钠注射液的测定(辅料为苯酚) | 第59页 |
| 2.3.4.2 低分子量肝素钠的测定 | 第59-61页 |
| 2.3.4.2.1 LMWH原料药的测定 | 第59-60页 |
| 2.3.4.2.2 被OSCS污染的LMWH原料药的测定 | 第60-61页 |
| 2.3.4.2.3 LMWH注射液的测定 | 第61页 |
| 2.3.4.2.4 被OSCS污染的LMWH注射液的测定 | 第61页 |
| 2.3.4.3 依诺肝素钠的测定 | 第61-64页 |
| 2.3.4.3.1 依诺肝素钠原料药的测定 | 第62页 |
| 2.3.4.3.2 被OSCS污染的依诺肝素钠原料药的测定 | 第62-63页 |
| 2.3.4.3.3 依诺肝素钠注射液的测定 | 第63页 |
| 2.3.4.3.4 被OSCS的依诺肝素钠注射液的测定 | 第63-64页 |
| 2.3.5 讨论 | 第64-65页 |
| 2.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 第三章 毛细管电泳、核磁共振和HPLC法测定肝素钠中的OSCS含量的比较研究 | 第67-77页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第67-69页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 3.2.1.1 CE和NMR所用实验材料 | 第67页 |
| 3.2.1.2 阴离子交换HPLC法所用实验材料 | 第67-68页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 3.2.2.1 肝素钠的毛细管电泳分析 | 第68页 |
| 3.2.2.2 肝素钠的核磁共振氢谱分析 | 第68页 |
| 3.2.2.3 肝素钠的离子交换HPLC分析 | 第68-69页 |
| 3.3 结果及讨论 | 第69-75页 |
| 3.3.1 肝素钠的毛细管电泳分析 | 第69-71页 |
| 3.3.1.1 肝素钠原料药的测定 | 第70-71页 |
| 3.3.1.2 被OSCS污染的肝素钠原料药的测定 | 第71页 |
| 3.3.2 肝素钠的核磁共振图谱 | 第71-73页 |
| 3.3.2.1 肝素钠原料药的测定 | 第72-73页 |
| 3.3.2.2 被OSCS污染的肝素钠原料药的测定 | 第73页 |
| 3.3.3 肝素钠的高效液相色谱分析 | 第73-75页 |
| 3.3.3.1 系统适用性溶液的测定 | 第73-74页 |
| 3.3.3.2 肝素钠的高效液相色谱图对比分析 | 第74-75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第四章 肝素钠效价的研究——天青A快速测定法 | 第77-85页 |
| 4.1 引言 | 第77-78页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第78-81页 |
| 4.2.1 实验材料与设备 | 第78页 |
| 4.2.1.1 实验材料 | 第78页 |
| 4.2.1.2 实验设备 | 第78页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第78-81页 |
| 4.2.2.1 天青A改良双波长分光光度法 | 第78-80页 |
| 4.2.2.1.1 标准曲线制备 | 第79页 |
| 4.2.2.1.2 样品测定 | 第79页 |
| 4.2.2.1.3 计算 | 第79-80页 |
| 4.2.2.2 绵羊血浆法测定肝素钠效价 | 第80-81页 |
| 4.2.2.2.1 标准品溶液的制备 | 第80页 |
| 4.2.2.2.2 样品溶液的制备 | 第80页 |
| 4.2.2.2.3 测定方法 | 第80-81页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第81-83页 |
| 4.3.1 天青A双波长分光光度法的方法学研究 | 第81-82页 |
| 4.3.1.1 标准曲线 | 第81页 |
| 4.3.1.2 方法的精密度 | 第81-82页 |
| 4.3.1.3 方法的准确度 | 第82页 |
| 4.3.2 本法测定结果与绵羊血浆法结果的比较 | 第82-83页 |
| 4.4 本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 结论和建议 | 第85-86页 |
| 5.1 结论 | 第85页 |
| 5.2 建议 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 作者简介 | 第92页 |
