| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 脱卤酶简介 | 第13-18页 |
| 1.1.1 脱卤酶的来源和分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 脱卤酶的立体结构和催化机制 | 第14-17页 |
| 1.1.3 脱卤酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 2-氯丙酸概述 | 第18-21页 |
| 1.2.1 2-氯丙酸的理化性质 | 第18页 |
| 1.2.2 2-氯丙酸的用途 | 第18-19页 |
| 1.2.3 2-氯丙酸的制备 | 第19-21页 |
| 1.3 酶的定向进化 | 第21-31页 |
| 1.3.1 酶的定向进化的背景 | 第21-28页 |
| 1.3.2 酶的定向进化的原理和方法 | 第28-31页 |
| 1.4 本课题的研究思路 | 第31-33页 |
| 1.4.1 S-2-氣两酸脱奇酶的研究思路 | 第31-32页 |
| 1.4.2 R-2-氣两酸脱运埯的研究思路 | 第32页 |
| 1.4.3 具体过程 | 第32-33页 |
| 第二章 S-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化 | 第33-56页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-46页 |
| 2.2.1 材料 | 第33-36页 |
| 2.2.2 方法 | 第36-46页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第46-55页 |
| 2.3.1 易错PCR条件的确定 | 第46-47页 |
| 2.3.2 突变文库的构建 | 第47-50页 |
| 2.3.3 高通量筛选结果 | 第50-52页 |
| 2.3.4 进化酶的纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.5 进化酶比活力的测定 | 第53页 |
| 2.3.6 动力学参数的测定 | 第53-54页 |
| 2.3.7 分子模拟 | 第54-55页 |
| 2.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章 DehII-B2酶法制备R-2-氯丙酸 | 第56-64页 |
| 3.1 引言 | 第56页 |
| 3.2 材料与方法 | 第56-58页 |
| 3.2.1 材料 | 第56页 |
| 3.2.2 方法 | 第56-58页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 3.3.1 DehII-B2的最适温度与热稳定性 | 第58-59页 |
| 3.3.2 DehII-B2的最适pH与pH稳定性 | 第59-60页 |
| 3.3.3 DehII-B2的底物谱 | 第60-61页 |
| 3.3.4 DehII-B2全细胞酶活与粗酶液酶活的比较 | 第61页 |
| 3.3.5 制备R-2-氯丙酸的温度条件优化的研究 | 第61-62页 |
| 3.3.6 制备R-2-氯丙酸的底物浓度优化的研究 | 第62-63页 |
| 3.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 R-2-氯丙酸脱卤酶的定点突变 | 第64-76页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 材料 | 第64-65页 |
| 4.2.2 方法 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-75页 |
| 4.3.1 饱和突变位点的确定 | 第66-68页 |
| 4.3.2 饱和突变文库建立与筛选 | 第68-69页 |
| 4.3.3 突变酶的三维结构 | 第69-70页 |
| 4.3.4 对所建模型的可靠性评估 | 第70-71页 |
| 4.3.5 对模拟结果的机理假说 | 第71-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第五章 R-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化 | 第76-90页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 材料与方法 | 第76页 |
| 5.2.1 材料 | 第76页 |
| 5.2.2 方法 | 第76页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第76-88页 |
| 5.3.1 易错PCR条件的确定 | 第76-77页 |
| 5.3.2 突变文库的构建 | 第77页 |
| 5.3.3 高通量筛选结果 | 第77-78页 |
| 5.3.4 突变子的纯化 | 第78-79页 |
| 5.3.5 分子模拟 | 第79-88页 |
| 5.4 本章小结 | 第88-90页 |
| 第六章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 6.1 结论 | 第90-91页 |
| 6.1.1 S-2-CPA脱卤酶的分子改造 | 第90页 |
| 6.1.2 S-2-CPA脱卤酶的应用 | 第90页 |
| 6.1.3 R-2-CPA脱卤酶的分子改造 | 第90-91页 |
| 6.2 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录 | 第100-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
