| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 RIPK1的研究背景 | 第11-13页 |
| 1.1.1 RIP家族 | 第11页 |
| 1.1.2 RIPK1的结构 | 第11页 |
| 1.1.3 RIPK1的功能 | 第11-13页 |
| 1.2 紫外辐射与细胞损伤 | 第13-14页 |
| 1.3 CRISPR/Cas技术的研究背景 | 第14-16页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas技术简介 | 第14页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas技术原理 | 第14-15页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas技术应用 | 第15-16页 |
| 1.4 本实验研究内容及意义 | 第16-19页 |
| 第2章 RIPK1稳定敲除细胞模型的构建及鉴定 | 第19-39页 |
| 2.1 实验试剂及仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 敲除载体CRISPR-sgRNA构建 | 第21-24页 |
| 2.2.2 HaCaT细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2.3 嘌呤霉素的筛选浓度的测定 | 第25页 |
| 2.2.4 HaCaT细胞转染条件优化 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PX459-sg RNA转染及混合克隆鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.6 有限稀释法细胞筛选 | 第28页 |
| 2.2.7 蛋白和基因组水平鉴定 | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-34页 |
| 2.3.1 人类永生化表皮细胞HaCaT细胞中RIPK1的表达 | 第28-29页 |
| 2.3.2 靶向RIPK1的PX459-sgRNA1~PX459-sg RNA4重组载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 HaCaT细胞转染条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 重组载体转染和敲除效率的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.6 敲除细胞模型的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-39页 |
| 第3章 RIPK1敲除对HaCaT细胞生物学特征的影响 | 第39-53页 |
| 3.1 实验试剂及仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 主要溶液 | 第39页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 细胞培养及形态观察 | 第40页 |
| 3.2.2 CCK8实验检测细胞增殖 | 第40页 |
| 3.2.3 流式细胞术检测细胞周期 | 第40-41页 |
| 3.2.4 流式细胞术检测TNF-α 诱导细胞死亡 | 第41页 |
| 3.2.5 ELISA检测细胞上清中IL-1α 的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.6 统计学处理 | 第42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 RIPK1稳定敲除对细胞形态的影响 | 第42页 |
| 3.3.2 RIPK1稳定敲除对细胞增殖能力的影响 | 第42页 |
| 3.3.3 RIPK1稳定敲除对细胞周期的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 RIPK1稳定敲除对细胞凋亡的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 RIPK1敲除对TNF-α 诱导细胞死亡的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.6 RIPK1敲除时UVB照射对细胞生物学活性的影响 | 第46-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-53页 |
| 第4章 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第65页 |
