| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第10-30页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-12页 |
| 1.1.1 世界可再生能源发展趋势 | 第10-11页 |
| 1.1.2 燃料乙醇的研究意义 | 第11-12页 |
| 1.2 木糖的代谢途径 | 第12-15页 |
| 1.2.1 木糖的跨膜运送 | 第12-13页 |
| 1.2.2 木糖转化成5-磷酸木酮糖 | 第13-14页 |
| 1.2.3 磷酸戊糖途径 | 第14-15页 |
| 1.2.4 乙醇生成 | 第15页 |
| 1.3 自然界中能够发酵木糖产生乙醇的微生物 | 第15-18页 |
| 1.3.1 细菌发酵木糖 | 第15-16页 |
| 1.3.2 丝状真菌发酵木糖 | 第16页 |
| 1.3.3 酵母发酵木糖 | 第16-18页 |
| 1.4 木糖醇脱氢酶研究现状 | 第18-21页 |
| 1.5 酿酒酵母发酵木糖基因工程菌株的构建 | 第21-25页 |
| 1.5.1 转入xy11和xy12等木糖代谢基因 | 第22-24页 |
| 1.5.2 提高酵母发酵木酮糖产乙醇的能力 | 第24-25页 |
| 1.6 选择标记 | 第25-27页 |
| 1.6.1 寄主互补系统 | 第26页 |
| 1.6.2 显性选择系统 | 第26-27页 |
| 1.7 展望 | 第27-28页 |
| 1.8 本课题研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 1.8.1 本课题研究的目的 | 第28页 |
| 1.8.2 本课题研究的意义 | 第28-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-60页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-38页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第30-33页 |
| 2.1.2 扩增引物 | 第33页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.1.5 主要分子生物学及生化试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.6 主要缓冲液及试剂配制 | 第36-38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-60页 |
| 2.2.1 高产醇酿酒酵母受体的筛选 | 第38-39页 |
| 2.2.2 目的基因的克隆与测序 | 第39-47页 |
| 2.2.3 重组表达载体pLX-A 的构建 | 第47-49页 |
| 2.2.4 重组表达载体pLX-AG 的构建 | 第49-51页 |
| 2.2.5 重组表达载体pLX-AGR 的构建 | 第51-54页 |
| 2.2.6 重组表达载体pLX-AGRX 的构建 | 第54-55页 |
| 2.2.7 重组表达载体pLX-AGRX 转化酿酒酵母W5 | 第55-57页 |
| 2.2.8 重组基因工程菌木糖醇脱氢酶酶活测定 | 第57-59页 |
| 2.2.9 重组菌的稳定性测定 | 第59-60页 |
| 第3章 结果与分析 | 第60-95页 |
| 3.1 高产醇酿酒酵母受体的筛选 | 第60页 |
| 3.1.1 TTC 法初步筛选产醇酵母 | 第60页 |
| 3.1.2 高效液相法筛选高产醇酵母 | 第60页 |
| 3.2 目的基因克隆 | 第60-79页 |
| 3.2.1 休哈塔假丝酵母xy12基因克隆与测序 | 第60-74页 |
| 3.2.2 ADH终止子基因片段克隆与测序 | 第74-76页 |
| 3.2.3 G418抗性基因克隆与测序 | 第76-78页 |
| 3.2.4 rDNA基因片段克隆 | 第78-79页 |
| 3.3 重组表达载体pLX-A构建 | 第79-82页 |
| 3.3.1 G418 对大肠杆菌DH5α的最低抑菌浓度 | 第79-80页 |
| 3.3.2 构建质粒pLX-A | 第80-82页 |
| 3.4 重组表达载体pLX-AG 构建 | 第82-84页 |
| 3.5 重组表达载体pLX-AGR 构建 | 第84-86页 |
| 3.6 重组表达载体pLX-AGRX 构建 | 第86-88页 |
| 3.7 重组表达载体pLX-AGRX 转化到酿酒酵母W5 | 第88-91页 |
| 3.7.1 重组质粒线性化 | 第88-89页 |
| 3.7.2 G418 对W5 的最低抑菌浓度 | 第89-90页 |
| 3.7.3 重组基因工程菌的筛选与鉴定 | 第90-91页 |
| 3.8 重组基因工程菌木糖醇脱氢酶酶活测定 | 第91-93页 |
| 3.8.1 重组菌的粗酶液蛋白浓度 | 第91页 |
| 3.8.2 木糖醇脱氢酶酶活 | 第91-93页 |
| 3.9 重组酿酒酵母的稳定性 | 第93-95页 |
| 第4章 讨论 | 第95-102页 |
| 4.1 木糖醇脱氢酶酶活 | 第95-96页 |
| 4.2 XDH 基因的克隆 | 第96-97页 |
| 4.3 XDH 基因的表达 | 第97-101页 |
| 4.3.1 表达载体 | 第97-98页 |
| 4.3.2 受体菌的选择 | 第98页 |
| 4.3.3 载体中酶切位点分析与选择 | 第98-99页 |
| 4.3.4 构建方法 | 第99-100页 |
| 4.3.5 转化酿酒酵母的方法 | 第100-101页 |
| 4.4 后续工作设想 | 第101-102页 |
| 第5章 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 附录1 | 第114-115页 |
| 附录2 | 第115-116页 |
| 附录 3 | 第116-118页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第118页 |
