冬虫夏草与蛹虫草原生质体融合研究
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1 原生质体融合的研究进展 | 第12-16页 |
| 2 原生质体融合的技术路线 | 第16-24页 |
| 2.1 亲本原生质体的制备 | 第17-19页 |
| 2.1.1 材料的选取 | 第17页 |
| 2.1.2 培养方法 | 第17页 |
| 2.1.3 菌丝培养方式 | 第17页 |
| 2.1.4 菌龄 | 第17-18页 |
| 2.1.5 酶种类的选择 | 第18页 |
| 2.1.6 酶液组分及浓度配比 | 第18页 |
| 2.1.7 酶解温度和时间 | 第18-19页 |
| 2.1.8 渗透压稳定剂 | 第19页 |
| 2.2 亲本原生质体的再生 | 第19页 |
| 2.3 对出发菌株的标记 | 第19-21页 |
| 2.3.1 营养缺陷型标记 | 第19-20页 |
| 2.3.2 抗药性标记 | 第20页 |
| 2.3.3 荧光染色标记 | 第20页 |
| 2.3.4 灭活标记 | 第20页 |
| 2.3.5 自然标记 | 第20-21页 |
| 2.4 原生质体融合 | 第21-22页 |
| 2.4.1 离心法 | 第21页 |
| 2.4.2 融合剂诱导法 | 第21页 |
| 2.4.3 电融合法 | 第21页 |
| 2.4.4 激光诱导的细胞融合技术 | 第21-22页 |
| 2.5 融合子的鉴定 | 第22-24页 |
| 2.5.1 生物学方法 | 第22页 |
| 2.5.2 生化方面的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.5.3 分子生物学鉴定方法 | 第23-24页 |
| 3 出发菌株的研究概况及意义 | 第24-25页 |
| 4 虫草与蛹虫草原生质体融合的技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 两亲本菌株菌丝体最佳液体培养基的筛选 | 第27-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| 1.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 供试菌种 | 第27页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.1.4 培养基 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 1.2.1 固体培养与提纯复壮 | 第28页 |
| 1.2.2 出发菌株颉颃实验 | 第28-29页 |
| 1.2.3 液体培养基的筛选 | 第29-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.1 固体培养与提纯复壮 | 第31页 |
| 2.2 出发菌株颉颃实验 | 第31-32页 |
| 2.3 初选实验结果 | 第32页 |
| 2.4 比较实验结果 | 第32-33页 |
| 2.5 正交实验结果 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 两亲本菌株原生质体制备与再生条件的研究 | 第37-56页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 1.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 1.1.1 供试菌种 | 第37页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第37页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第37-38页 |
| 1.1.4 培养基 | 第38页 |
| 1.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 1.2.1 液体培养 | 第38页 |
| 1.2.2 两亲本原生质体的制备 | 第38-39页 |
| 1.2.3 两亲本原生质体的再生 | 第39页 |
| 1.2.4 正交实验设计 | 第39-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-49页 |
| 2.1 原生质体的释放方式 | 第41-42页 |
| 2.2 影响原生质体制备的诸因素分析 | 第42-47页 |
| 2.3 渗稳剂种类与原生质体再生的关系 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| 3.1 关于影响原生质体制备的相关因素探讨 | 第49-51页 |
| 3.1.1 菌丝体形态对原生质体得率的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.2 菌龄对原生质体得率的影响 | 第50页 |
| 3.1.3 酶液组分对原生质体得率的影响 | 第50页 |
| 3.1.4 酶解温度、时间对原生质体得率的影响 | 第50-51页 |
| 3.1.5 酶解方式对原生质体得率的影响 | 第51页 |
| 3.2 关于影响原生质体再生的相关因素探讨 | 第51-52页 |
| 3.2.1 破壁后的残余胞壁组分对再生的影响 | 第51页 |
| 3.2.2 培养基成分对再生的影响 | 第51页 |
| 3.2.3 渗稳剂对原生质体得率、再生率的影响 | 第51-52页 |
| 4 结论 | 第52页 |
| 5 原生质体制备前后菌丝体几方面比较 | 第52-55页 |
| 5.1 菌落形态与菌丝长势比较 | 第52-53页 |
| 5.2 菌丝体生长速度比较 | 第53页 |
| 5.3 颉颃实验 | 第53-55页 |
| 6 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 灭活标记及原生质体融合 | 第56-68页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 1.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 1.1.1 双亲菌株的原生质体 | 第56页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第56页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第56页 |
| 1.1.4 培养基 | 第56-57页 |
| 1.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 1.2.1 热灭活标记冬虫夏草 | 第57页 |
| 1.2.2 紫外灭活标记蛹虫草 | 第57页 |
| 1.2.3 原生质体融合 | 第57-58页 |
| 1.2.4 融合正交实验 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-65页 |
| 2.1 热灭活实验结果与分析 | 第59-61页 |
| 2.2 紫外灭活实验结果与分析 | 第61-62页 |
| 2.3 影响原生质体融合的诸因素分析 | 第62-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 3.1 灭活标记两亲本 | 第65-66页 |
| 3.2 对影响融合的诸多因素探讨 | 第66-67页 |
| 3.2.1 促融剂(fusogen)PEG浓度 | 第66-67页 |
| 3.2.2 无机离子 | 第67页 |
| 3.2.3 pH | 第67页 |
| 3.2.4 融合温度 | 第67页 |
| 3.2.5 融合时间 | 第67页 |
| 4 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 融合株的鉴定 | 第68-78页 |
| 1 材料与方法 | 第68-72页 |
| 1.1 实验材料 | 第68-70页 |
| 1.1.1 供试菌种 | 第68页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第68页 |
| 1.1.3 RAPD-PCR反应所用随机引物 | 第68-69页 |
| 1.1.4 仪器设备 | 第69-70页 |
| 1.1.5 培养基 | 第70页 |
| 1.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 1.2.1 双亲与融合株生长速率比较 | 第70页 |
| 1.2.2 颉颃实验,比较种间菌落特征 | 第70页 |
| 1.2.3 RAPD-PCR方法鉴定 | 第70-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-77页 |
| 2.1 三菌株生长速率比较结果 | 第72-73页 |
| 2.2 颉颃实验结果 | 第73-74页 |
| 2.3 DNA纯度检测 | 第74-75页 |
| 2.4 融合子与亲本的遗传相关性分析 | 第75-77页 |
| 3 讨论 | 第77页 |
| 4 小结 | 第77-78页 |
| 第六章 实验总结 | 第78-80页 |
| 1 原生质体的制备与再生 | 第78页 |
| 2 遗传标记双亲 | 第78页 |
| 3 原生质体融合 | 第78页 |
| 4 融合株鉴定 | 第78-79页 |
| 5 有待改进的环节 | 第79页 |
| 6 研究的创新之处 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
