| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 布氏杆菌的研究进展 | 第12-21页 |
| ·布氏杆菌概述 | 第12-13页 |
| ·布氏杆菌的致病性 | 第13-16页 |
| ·吞噬细胞内布氏杆菌的特异小生境 | 第13页 |
| ·布氏杆菌毒力因子的研究方法 | 第13-14页 |
| ·布氏杆菌的主要毒力因子 | 第14-16页 |
| ·布氏杆菌病的诊断 | 第16-18页 |
| ·病原学鉴定 | 第16-17页 |
| ·血清学检测方法 | 第17-18页 |
| ·变态反应（过敏反应）试验 | 第18页 |
| ·布氏杆菌的疫苗 | 第18-19页 |
| ·活疫苗与灭活疫苗 | 第18-19页 |
| ·亚单位和 DNA 疫苗 | 第19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| ·全基因组范围内筛选、基因芯片与蛋白质组学 | 第19-20页 |
| ·体内展示技术 | 第20页 |
| ·基因缺失细胞及基因敲除小鼠 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-29页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·临床血清样品 | 第21页 |
| ·主要试剂、质粒 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·VirB12 蛋白的表达及ELISA 方法的初步建立 | 第21-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21页 |
| ·virB12 基因的扩增 | 第21-22页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第22页 |
| ·virB12 重组蛋白的表达 | 第22页 |
| ·virB12 重组蛋白的纯化及验证 | 第22页 |
| ·间接ELISA 条件的优化 | 第22页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第22页 |
| ·间接ELISA 的特异性试验 | 第22页 |
| ·间接ELISA 的敏感性试验 | 第22-23页 |
| ·vi1812 基因缺失疫苗的构建 | 第23-29页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·同源重组质粒pSP-vi1812-k 的构建 | 第23-26页 |
| ·缺失株M5-90-virB12的构建 | 第26页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 的筛选 | 第26-27页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 稳定性及PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 的Western Blot 鉴定 | 第27-28页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 在小鼠体内的安全性试验 | 第28页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 小鼠体内短期保护试验 | 第28页 |
| ·缺失株M5-90-virB12 和M5-90 免疫后检测羊s-LPS 抗体 | 第28-29页 |
| 第三章 实验结果 | 第29-37页 |
| ·virB12 蛋白的表达及ELISA 方法的初步建立 | 第29-32页 |
| ·virB12 基因的扩增、测序及重组质粒的构建 | 第29页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第29-30页 |
| ·表达蛋白的Western Blot 鉴定结果 | 第30页 |
| ·间接ELISA 条件优化的结果 | 第30-31页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第31-32页 |
| ·间接 ELISA 的特异性 | 第32页 |
| ·间接 ELISA 的敏感性 | 第32页 |
| ·virB12 基因缺失疫苗的构建 | 第32-37页 |
| ·同源臂的 PCR 扩增及鉴定 | 第32-33页 |
| ·同源重组质粒pSP-virB12-k 的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 的 PCR 鉴定 | 第33-34页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 的 Western Blot 鉴定 | 第34页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 在小鼠体内安全性试验测定结果 | 第34-35页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 小鼠短期免疫保护试验 | 第35-36页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 和 M5-90 免疫后检测羊s-LPS 抗体 | 第36-37页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第37-39页 |
| ·virB12 基因作为构建标记疫苗的候选基因 | 第37页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12的的小鼠短期免疫保护试验 | 第38页 |
| ·缺失株 M5-90virB12 的的小鼠体内安全性试验 | 第38页 |
| ·小鼠脾脏中细菌数的计算方法 | 第38页 |
| ·缺失株 M5-90-virB12 在羊体内免疫原性的评估 | 第38-39页 |
| 第五章 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
