| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 一 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 美丽鸡血藤研究 | 第10-11页 |
| 1.1.1 美丽鸡血藤生药学的研究 | 第10页 |
| 1.1.2 美丽鸡血藤化学成分分析 | 第10-11页 |
| 1.1.3 美丽鸡血藤药理研究 | 第11页 |
| 1.1.4 美丽鸡血藤离体快繁研究 | 第11页 |
| 1.2 植物种质资源保存 | 第11-13页 |
| 1.3 种质资源保存方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 种子保存 | 第13-14页 |
| 1.3.2 种质资源圃 | 第14页 |
| 1.3.3 组织培养保存 | 第14页 |
| 1.4 种质资源超低温保存 | 第14-17页 |
| 1.4.1 超低温保存理论基础 | 第15-16页 |
| 1.4.2 超低温保存程序 | 第16页 |
| 1.4.3 超低温保存方法 | 第16-17页 |
| 1.5 植物种质资源超低温保存基因表达 | 第17-18页 |
| 1.6 植物种质资源超低温保存遗传稳定性 | 第18-20页 |
| 1.6.1 简单重复序列(SSR)分析 | 第19页 |
| 1.6.2 简单重复间序列(ISSR)分析 | 第19-20页 |
| 1.7 本实验研究的目的和意义 | 第20页 |
| 1.8 本实验研究路线 | 第20-21页 |
| 二 材料和方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 仪器设备和生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 基本培养基 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 美丽鸡血藤腋芽超低温保存程序的研究 | 第23-25页 |
| 2.2.1.1 植物组织的大小和LS处理 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 PVS_2脱水并在液氮中冷冻 | 第24页 |
| 2.2.1.3 复温和卸载 | 第24页 |
| 2.2.1.4 植物生长调节剂(PGR)和再生 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 试验设计与结果调查 | 第25页 |
| 2.2.2 超低温保存后逆境相关基因REAL TIME PCR表达分析 | 第25-31页 |
| 2.2.2.1 RNA的提取 | 第25-27页 |
| 2.2.2.2 Real time PCR——“引物设计” | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 反转录cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.2.4 标准曲线制作 | 第29-30页 |
| 2.2.2.5 Real time PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.2.3 ISSR和SSR分子标记对美丽鸡血藤腋芽超低温保存后再生植株稳定性分析 | 第31-35页 |
| 2.2.3.1 DNA提取 | 第31页 |
| 2.2.3.2 检测DNA | 第31-32页 |
| 2.2.3.4 ISSR稳定性检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3.5 筛选引物 | 第33页 |
| 2.2.3.6 SSR稳定性检测 | 第33-35页 |
| 三 结果与分析 | 第35-61页 |
| 3.1 美丽鸡血藤体系小滴玻璃化法超低温保存方法 | 第35-48页 |
| 3.1.1 植物形态学 | 第35-37页 |
| 3.1.2 超低温保存后再生植株的不同类型 | 第37-38页 |
| 3.1.3 LS和PVS_2不同处理方式及处理时间对超低温保存后腋芽再生率的影响 | 第38-40页 |
| 3.1.3.1 LS和PVS_2静止条件处理对再生率的影响 | 第38页 |
| 3.1.3.2 LS(25℃,150 rpm)和PVS_2(静止状态)处理对再生率的影响 | 第38-39页 |
| 3.1.3.3 LS(25℃,150 rpm)和PVS_2(摇床)处理对再生率的影响 | 第39-40页 |
| 3.1.4 LS不同处理时间对再生率的影响 | 第40-41页 |
| 3.1.5 外植体含水量对再生率的影响 | 第41-42页 |
| 3.1.6 外植体的大小和切割方式对再生率的影响 | 第42-44页 |
| 3.1.7 离体组织继代培养次数再生率的影响 | 第44-45页 |
| 3.1.8 复温培养时黑暗培养时间对再生率的影响 | 第45-46页 |
| 3.1.9 黑暗培养阶段分裂素对再生率和愈伤组织的影响 | 第46-47页 |
| 3.1.10 光照培养阶段植物生长调节剂(PGR)对再生率和愈伤组织的影响 | 第47-48页 |
| 3.2 超低温保存后温逆境相关基REAL TIME PCR表达分析 | 第48-57页 |
| 3.2.1 逆境相关基因片段序列分析 | 第48-51页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第51-52页 |
| 3.2.3 标准曲线制作 | 第52-55页 |
| 3.2.4 逆境基因表达量分析 | 第55-57页 |
| 3.3 美丽鸡血藤超低温保存再生植株变异性检测 | 第57-61页 |
| 3.3.1 ISSR分子标记检测再生植株遗传变异性 | 第57-59页 |
| 3.3.1.1 DNA的提取 | 第57页 |
| 3.3.1.2 ISSR电泳反应的结果 | 第57-59页 |
| 3.3.2 SSR分子标记检测再生植株遗传变异性 | 第59-61页 |
| 四 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 美丽鸡血藤腋芽超低温保存体系的建立 | 第61-63页 |
| 4.1.1 LS不同处理时间对超低温保存后再生植株的影响 | 第61-62页 |
| 4.1.2 PVS_2处理时间对超低温保存后再生植株的影响 | 第62页 |
| 4.1.3 外植体的大小和切割方式对超低温保存后再生植株的影响 | 第62-63页 |
| 4.1.4 立体组织继代培养时间对超低温保存后再生植株的影响 | 第63页 |
| 4.1.5 植物生长调节剂对超低温保存后再生植株的影响 | 第63页 |
| 4.2 美丽鸡血藤超低温保存后逆境相关基因REAL TIME PCR表达分析 | 第63-65页 |
| 4.3 美丽鸡血藤超低温保存后再生植株的遗传稳定性分析 | 第65-67页 |
| 4.3.1 小滴玻璃化法超低温保存对美丽鸡血藤再生植株形态的影响 | 第65页 |
| 4.3.2 ISSR和SSR分子标记技术检测超低温保存后其遗传稳定性 | 第65-67页 |
| 五 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
