| 摘要 | 第12-14页 |
| 英文摘要 | 第14-16页 |
| 1 引言 | 第17-31页 |
| 1.1 香鳞毛蕨的研究概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1 香鳞毛蕨简介 | 第17页 |
| 1.1.2 香鳞毛蕨药用价值 | 第17-19页 |
| 1.2 苯丙烷衍生物代谢途径的研究概述 | 第19-21页 |
| 1.2.1 苯丙烷类代谢产物在植物体中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.2 苯丙烷衍生物代谢途径 | 第20-21页 |
| 1.3 4-香豆酸辅酶A连接酶（4CL) 研究进展 | 第21-24页 |
| 1.3.1 4CL基因家族 | 第21-23页 |
| 1.3.2 4CL同工酶研究 | 第23-24页 |
| 1.3.3 4CL表达调控研究 | 第24页 |
| 1.4 本实验中应用的主要技术 | 第24-28页 |
| 1.4.1 转录组测序技术 | 第24-26页 |
| 1.4.2 c DNA末端快速扩增技术(RACE)技术 | 第26-27页 |
| 1.4.3 荧光定量PCR技术 | 第27-28页 |
| 1.5 本研究目的、意义及技术路线 | 第28-31页 |
| 1.5.1 研究目的、意义 | 第28-30页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-56页 |
| 2.1 试验材料 | 第31页 |
| 2.2 香鳞毛蕨 4CL基因家族的克隆 | 第31-42页 |
| 2.2.1 植物材料、菌种及质粒 | 第31页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.3 主要药品及试剂 | 第32页 |
| 2.2.4 缓冲液、主要试剂及培养基的配置 | 第32页 |
| 2.2.5 香鳞毛蕨总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.6 RNA纯度及浓度检测 | 第33页 |
| 2.2.7 香鳞毛蕨c DNA的合成 | 第33-34页 |
| 2.2.8 香鳞毛蕨 4CL基因家族的电子克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.9 香鳞毛蕨 4CL基因家族c DNA 3′ 端片段的克隆 | 第35-38页 |
| 2.2.10 香鳞毛蕨 4CL基因家族c DNA 5′端片段的克隆 | 第38-40页 |
| 2.2.11 香鳞毛蕨 4CL基因家族开放阅读框架的克隆 | 第40-42页 |
| 2.3 香鳞毛蕨 4CL基因家族的生物信息学分析 | 第42页 |
| 2.4 香鳞毛蕨 4CL基因家族的特异性表达 | 第42-45页 |
| 2.4.1 不同处理条件下香鳞毛蕨孢子体幼苗的培养 | 第42-43页 |
| 2.4.2 香鳞毛蕨孢子体幼苗不同处理条件下RNA的提取 | 第43页 |
| 2.4.3 c DNA第一链的合成 | 第43页 |
| 2.4.4 香鳞毛蕨 4CL基因家族实时荧光定量PCR分析 | 第43-44页 |
| 2.4.5 数据的统计分析及作图 | 第44-45页 |
| 2.5 香鳞毛蕨总黄酮类化合物和木质素含量的测定 | 第45-47页 |
| 2.5.1 试验材料 | 第45页 |
| 2.5.2 主要仪器 | 第45页 |
| 2.5.3 试验试剂 | 第45页 |
| 2.5.4 香鳞毛蕨黄酮类化合物的测定 | 第45-47页 |
| 2.5.5 香鳞毛蕨总木质素含量的测定 | 第47页 |
| 2.6 香鳞毛蕨 4CL基因家族的原核表达及活性测定 | 第47-51页 |
| 2.6.1 菌株和质粒 | 第47-48页 |
| 2.6.2 原核表达载体构建 | 第48-49页 |
| 2.6.3 目的蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 2.6.4 SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第50页 |
| 2.6.5 重组蛋白酶活性测定 | 第50-51页 |
| 2.6.6 香鳞毛蕨 4CL2蛋白的纯化 | 第51页 |
| 2.7 香鳞毛蕨 4CL基因的真核表达及功能验证 | 第51-56页 |
| 2.7.1 菌株及质粒 | 第51页 |
| 2.7.2 常用试剂及培养基 | 第51-52页 |
| 2.7.3 香鳞毛蕨Df4CL1基因植物表达载体的构建 | 第52页 |
| 2.7.4 农杆菌菌液的制备 | 第52-53页 |
| 2.7.5 Df4CL1基因对拟南芥的遗传转化 | 第53-54页 |
| 2.7.6 Df4CL1基因转基因纯合植株的获得 | 第54页 |
| 2.7.7 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 2.7.8 转基因拟南芥的代谢产物的总黄酮含量和木质素含量的测定 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-106页 |
| 3.1 香鳞毛蕨 4CL基因家族的筛选 | 第56-57页 |
| 3.2 香鳞毛蕨 4CL基因家族的克隆 | 第57-67页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第57页 |
| 3.2.2 Df4CL1基因全长克隆 | 第57-60页 |
| 3.2.3 Df4CL2基因全长克隆 | 第60-62页 |
| 3.2.4 Df4CL3基因全长克隆 | 第62-64页 |
| 3.2.5 Df4CL4基因全长克隆 | 第64-66页 |
| 3.2.6 Df4CL基因家族开放阅读框架的克隆 | 第66-67页 |
| 3.3 香鳞毛蕨 4CL基因家族的核酸序列分析 | 第67-78页 |
| 3.3.1 Df4CL基因家族cDNA序列同源性分析 | 第67-69页 |
| 3.3.2 Df4CL基因家族密码子分析 | 第69-73页 |
| 3.3.3 Df4CL基因家族表达预测 | 第73-78页 |
| 3.3.4 Df4CL基因家族遗传进化分析 | 第78页 |
| 3.4 香鳞毛蕨 4CL基因家族的蛋白序列分析及同源模建 | 第78-89页 |
| 3.4.1 Df4CL家族蛋白一级结构的预测及分析 | 第78-80页 |
| 3.4.2 Df4CL家族蛋白二级结构的预测及分析 | 第80-81页 |
| 3.4.3 Df4CL蛋白疏水性分析 | 第81-82页 |
| 3.4.4 Df4CL家族蛋白质的信号肽预测 | 第82-83页 |
| 3.4.5 Df4CL家族蛋白卷曲螺旋预测分析 | 第83-84页 |
| 3.4.6 Df4CL家族蛋白跨膜区分析 | 第84-85页 |
| 3.4.7 Df4CL家族蛋白质糖基化位点分析 | 第85-86页 |
| 3.4.8 Df4CL家族蛋白磷酸化位点预测 | 第86-87页 |
| 3.4.9 Df4CL家族蛋白高级结构的预测及分析 | 第87-88页 |
| 3.4.10 Df4CL家族蛋白遗传进化分析 | 第88-89页 |
| 3.5 香鳞毛蕨 4CL基因家族的特异性表达 | 第89-92页 |
| 3.5.1 Df4CL基因家族发育及不同部位的特异性表达 | 第89页 |
| 3.5.2 Df4CL基因家族在温光诱导条件下的特异性表达 | 第89-91页 |
| 3.5.3 Df4CL基因家族在紫外条件诱导下的特异性表达 | 第91-92页 |
| 3.6 香鳞毛蕨总黄酮类化合物和总木质素含量的测定 | 第92-95页 |
| 3.6.1 香鳞毛蕨不同部位的总黄酮类化合物含量 | 第92页 |
| 3.6.2 香鳞毛蕨温度诱导条件下的总黄酮类化合物含量 | 第92-93页 |
| 3.6.3 香鳞毛蕨紫外诱导条件下的总黄酮类化合物含量 | 第93页 |
| 3.6.4 香鳞毛蕨不同部位的总木质素含量 | 第93-94页 |
| 3.6.5 香鳞毛蕨温度诱导条件下的总木质素含量 | 第94-95页 |
| 3.6.6 香鳞毛蕨紫外条件处理下的总木质素含量 | 第95页 |
| 3.7 香鳞毛蕨 4CL基因家族的原核表达 | 第95-100页 |
| 3.7.1 目的片段的扩增 | 第95-96页 |
| 3.7.2 双酶切p ET-28a表达载体和目的基因 | 第96页 |
| 3.7.3 p ET-28a表达载体和目的基因的连接 | 第96-97页 |
| 3.7.4 SDS-PAGE检测表达重组蛋白 | 第97-98页 |
| 3.7.5 不同IPTG浓度诱导香鳞毛蕨Df4CL2的表达 | 第98-99页 |
| 3.7.6 不同IPTG浓度诱导香鳞毛蕨Df4CL2重组蛋白的活性测定 | 第99-100页 |
| 3.7.7 Df4CL2重组蛋白的纯化 | 第100页 |
| 3.8 Df4CL1基因的过表达体的构建及基因的功能验证 | 第100-106页 |
| 3.8.1 含酶切位点的目的片段的扩增 | 第100-101页 |
| 3.8.2 表达载体和目的基因的双酶切、连接及验证 | 第101-102页 |
| 3.8.3 p BI121-Df4CL1转入农杆菌中的验证 | 第102页 |
| 3.8.4 4CL过表达体拟南芥的获得 | 第102-104页 |
| 3.8.5 Df4CL过表达体拟南芥的PCR鉴定 | 第104页 |
| 3.8.6 4CL过表达拟南芥的总黄酮含量测定 | 第104-105页 |
| 3.8.7 Df4CL1过表达体拟南芥的总木质素含量的测定 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-113页 |
| 4.1 香鳞毛蕨 4CL基因家族的筛选 | 第106-107页 |
| 4.2 香鳞毛蕨Df4CL基因家族成员的分析 | 第107-108页 |
| 4.3 香鳞毛蕨 4CL基因家族的生物信息学分析 | 第108-109页 |
| 4.4 香鳞毛蕨 4CL基因家族的原核表达 | 第109页 |
| 4.5 香鳞毛蕨 4CL基因家族与总黄酮和木质素含量的关系 | 第109-113页 |
| 5 结论 | 第113-114页 |
| 6 创新点 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第129页 |
