| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 符号及缩略语 | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 引言 | 第8-10页 |
| 1.2 蚊、蠓与虫媒疾病 | 第10页 |
| 1.3 病毒的分离鉴定 | 第10-11页 |
| 1.3.1 病毒的分离方法 | 第10-11页 |
| 1.3.2 病毒的鉴定 | 第11页 |
| 1.4 乙型脑炎 | 第11-16页 |
| 1.4.1 乙型脑炎研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4.2 乙型脑炎病毒的结构与理化特性 | 第13-14页 |
| 1.4.3 乙型脑炎病毒毒力基因和致病机制 | 第14-15页 |
| 1.4.4 乙型脑炎检测技术 | 第15页 |
| 1.4.5 乙型脑炎预防和控制 | 第15-16页 |
| 1.5 课题研究的意义和主要内容 | 第16-17页 |
| 第二章 虫媒病毒的分离与鉴定 | 第17-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-19页 |
| 2.1.1 主要试剂和试剂盒 | 第17页 |
| 2.1.2 实验所用溶液及其配制 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17-19页 |
| 2.2 虫媒样品采集 | 第19页 |
| 2.2.1 样品采集时间地点 | 第19页 |
| 2.2.2 样品采集方法 | 第19页 |
| 2.3 蚊虫分类 | 第19页 |
| 2.4 虫媒样品的前期处理 | 第19页 |
| 2.5 病毒的分离 | 第19-21页 |
| 2.6 病毒的核酸鉴定 | 第21-25页 |
| 2.6.1 核酸的提取 | 第21页 |
| 2.6.2 核酸片段扩增 | 第21-23页 |
| 2.6.3 扩增片段凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.6.4 目的片段纯化 | 第23页 |
| 2.6.5 进化树分析 | 第23-25页 |
| 2.7 结果与讨论 | 第25-31页 |
| 2.7.1 分类结果 | 第25-27页 |
| 2.7.2 细胞病变 | 第27-28页 |
| 2.7.3 PCR后核酸电泳图 | 第28-29页 |
| 2.7.4 测序结果 | 第29-30页 |
| 2.7.5 病毒进化树 | 第30-31页 |
| 2.8 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 分离的JEV病毒的生物学特性和分子特征分析 | 第32-40页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第32页 |
| 3.1.1 试剂、病毒、细胞和小鼠 | 第32页 |
| 3.1.2 细胞培养 | 第32页 |
| 3.2 JEV病毒的分子特征分析 | 第32页 |
| 3.2.1 分离株与参考株核苷酸及氨基酸同源性分析 | 第32页 |
| 3.2.2 分离株E蛋白氨基酸残基位点与参考毒株的差异 | 第32页 |
| 3.2.3 分离株与参考株重要蛋白氨基酸位点比较 | 第32页 |
| 3.3 JEV病毒的生物学特征分析 | 第32-33页 |
| 3.3.1 TCID_(50)测定 | 第32-33页 |
| 3.3.2 LD_(50)测定 | 第33页 |
| 3.3.3 病理切片 | 第33页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第33-38页 |
| 3.4.1 分离株与参考株核苷酸及氨基酸同源性 | 第33-34页 |
| 3.4.2 E蛋白氨基酸残基位点差异 | 第34页 |
| 3.4.3 分离株与参考株重要蛋白氨基酸位点差异 | 第34-36页 |
| 3.4.4 TCID_(50)测定结果 | 第36-37页 |
| 3.4.5 LD_(50)测定结果 | 第37-38页 |
| 3.4.6 病理切片 | 第38页 |
| 3.5 小结 | 第38-40页 |
| 第四章 鉴别JEV强弱毒株的一步TaqMan探针定量方法的建立 | 第40-46页 |
| 4.1 TaqMan探针技术 | 第40页 |
| 4.2 引物、探针设计与合成 | 第40-41页 |
| 4.3 疫苗株和野毒株病毒RNA的提取、反转录及PCR | 第41页 |
| 4.4 目的片段与T载体连接转化 | 第41页 |
| 4.5 菌落PCR及小量重组质粒的提取 | 第41-42页 |
| 4.6 TaqMan探针双重荧光定量方法的建立 | 第42页 |
| 4.6.1 计算重组阳性质粒模板的拷贝数 | 第42页 |
| 4.6.2 荧光定量反应体系的优化 | 第42页 |
| 4.6.3 JEV强弱毒株标准曲线的建立 | 第42页 |
| 4.7 结果与讨论 | 第42-44页 |
| 4.7.1 以cDNA为模板PCR结果 | 第42页 |
| 4.7.2 菌落PCR结果 | 第42-43页 |
| 4.7.3 重组阳性质粒拷贝数 | 第43页 |
| 4.7.4 荧光定量反应体系优化结果 | 第43页 |
| 4.7.5 质粒标准品疫苗株和野毒株的标准曲线 | 第43-44页 |
| 4.8 小结 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
